Participación del Factor Silenciador Neuronal Restrictivo - Tesis ...

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Hipótesis XREST/NRSF contribuye al establecimiento del territorio neural y regula la expresión de los genes neuronales estructurales durante la neurogénesis de Xenopus laevis. Objetivo General Determinar la participación de XREST/NRSF en el establecimiento del territorio neural y en la regulación de la expresión de genes neuronales estructurales durante la neurogénesis de Xenopus laevis. Para probar esta hipótesis se propone los siguientes objetivos específicos: Objetivos específicos. 1.- Determinar la participación de XREST/NRSF en la neurogénesis de X. laevis. 1.1 Analizar el patrón de expresión de XREST/NRSF. Se analizará el patrón de expresión del mRNA de XREST/NRSF mediante hibridación in situ durante el desarrollo embrionario. 1.2 Determinar la participación de XREST/NRSF en la neurogénesis. Este objetivo pretende definir en que etapas específicas y en que procesos del desarrollo neural XREST/NRSF participa activamente. 2.- Analizar el papel de XREST/NRSF en las vías involucradas en el establecimiento de la placa neural. Si bien el objetivo 1 identificará los procesos en que participa XREST/NRSF, y por consiguiente permitirá inferir las vías conocidas que se pueden relacionar con la función de XREST/NRSF, los antecedentes ya disponibles permiten plantear que XREST/NRSF podría 43
participar en la neurogénesis a través de su relación con las vias promotoras de epidermis y neuralizantes. 3.- Determinar la participación de XREST/NRSF en la regulación de la expresión de genes neuronales estructurales durante la diferenciación neuronal. En Xenopus la interferencia de la función de XREST/NRSF, conduce a la inhibición de la expresión de genes neuronales estructurales. Este objetivo pretende reevaluar este fenómeno y analizar el mecanismo asociado. 3.1 Probar el papel de XREST/NRSF en la regulación de la expresión de genes neuronales estructurales in vivo. A partir de los resultados obtenidos en 1.2 se analizará detalladamente los fenotipos asociados a la ganancia o interferencia de la función de XREST/NRSF en la diferenciación neuronal. 3.2 Probar que la adquisición de las características funcionales neuronales es regulada por XREST/NRSF. La adquisición de las características funcionales neuronales tales como la morfología y la excitabilidad, está en directa relación con la expresión de los genes neuronales estructurales durante la diferenciación neuronal. Este objetivo pretende determinar específicamente si XREST/NRSF regula la expresión de la corriente de sodio dependiente de potencial eléctrico durante la diferenciación de las neuronas espinales. 4.- Probar que la participación de XREST/NRSF en la neurogénesis es dependiente de la interacción con XCoREST. Gran parte de los mecanismos de represión y silenciamiento mediados por REST/NRSF involucran la participación de CoREST. En Xenopus, el patrón de expresión de XREST/NRSF es muy similar al de XCoREST durante la diferenciación neural. Este objetivo pretende analizar si XCoREST participa junto a XREST/NRSF en la neurogénesis a través de experimentos de pérdida de función y de interacción genetica. 44
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