Participación del Factor Silenciador Neuronal Restrictivo - Tesis ...

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-Amortiguador de Transcripción (TrisHCl pH 7,6 200 mM, MgCl2 30 mM, espermidina 20mM) (Roche, Alemania). Hibridación in situ: -Agua DEPC (DEPC 0,1% v/v en agua). -Ácido maleico (Merck, Darmstadt, Alemania). -Amortiguador de hibridación (formamida 50%, SSC 5X, RNA de levadura 1 mg/mL, heparina 100 mg/mL, Denhardt 1X, Tween 20 0, 1%, 10 mM EDTA, CHAPS 0, 1%). -Anhídrido acético (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -Anticuerpo anti-digoxigenina conjugado a fosfatasa alcalina (Roche, Alemania). -BCIP, 5-Bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato, 4-sal de toluidina (50 mg/mL en dimetilformamida) (Roche, Alemania). -BMBR, Boehringer Mannheim Blocking Reagent (Roche, Alemania). -Citrato de sodio (Merck, Darmstadt, Alemania). -CHAPS, (3-[(3-colamidopropil)-dimetilamonio]-1-propanosulfonato) (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -Cloruro de magnesio (Merck, Darmstadt, Alemania). -Cloruro de sodio (Merck, Darmstadt, Alemania). -Denhardt 50X (Ficoll 0, 1%, polivinilpirrolidona 0, 1% y BSA 0, 1%). -Deoxicolato de sodio (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -EDTA, ácido etilendiaminotetraacético (Merck, Darmstadt, Alemania). -Formamida (Merck, Darmstadt, Alemania). -Heparina (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -H2O2 30% (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -K3Fe(CN)6 (Merck, Darmstadt, Alemania) -K4Fe(CN)6*3H2O (Merck, Darmstadt, Alemania) -MAB, Tampón de ácido maleico (ácido maleico 100 mM, NaCl 150 mM, pH 7,5). -MAB/BMBR (BMBR 2% (p/v) en MAB). 47
-MEMPFA (MOPS 0,1 M pH 7,0 EGTA 2 mM, MgSO4 1 mM, paraformaldehido 4%). -Metanol (Merck, Darmstadt, Alemania). -MgCl2 (Merck, Darmstadt, Alemania). -MOPS, ácido 3-[N-morfolino] propanosulfónico (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -NBT, Cloruro de 4-nitro blue tetrazolium (100 mg/mL en dimetilformamida) (Boehringer Mannheim, Alemania). -Paraformaldehido (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -PBS 1X (Na2HPO4 10 mM, NaH2PO4 1,7 mM, NaCl 200 mM, pH 7,4). -PTw (Tween 20 0,1% (v/v) en PBS 1X). -RNA de levadura (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -Trietanolamina (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -TRIS (Merck, Darmstadt, Alemania). -Tween 20 (Sigma, St. Louis, EE.UU.). -Solución AP (TRIS 100 mM, MgCl2 50 mM, NaCl 100 mM, Tween 20 0,1% (v/v), pH 9,5). -Solución de blanqueo: H2O2 1,5%, PBS 1X, 30 mL sol. de hibridación por 10 mL solución). -Solución de lavado de sonda 1 (formamida 50%, SSC 2X, Tween 20 0,1% v/v). -Solución de lavado de sonda 2 (formamida 25%, SSC 2X, Tween 20 0,1% v/v). -Solución de lavado de sonda 3 (formamida 12,5%, SSC 2X, Tween 20 0,1% v/v). -Solución de lavado de sonda 4 (SSC 2X, Tween 20 0,1% v/v). -Solución de lavado de sonda 5 (SSC 0,2X, Tween 20 0,1% v/v). -SSC 20X (NaCl 3 M, citrato de sodio 0,3 M pH 7,4). -Solución revelado β-gal (K3Fe(CN)6 20 mM, K4Fe(CN)6*3H2O 20 mM, X-gal 0.1% en PBS 1x libre de ribonucleasas) 48
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Quisiera agradecer muy especialment
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