Participación del Factor Silenciador Neuronal Restrictivo - Tesis ...

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Sistemas Comerciales: -pGEM-T Vector System, (Promega, Madison, EE.UU.), utilizado para el clonamiento de productos de PCR. -TOPO-TA Cloning Kit for Sequencing, (Invitrogen, EE.UU.), utilizado para clonar productos de PCR. -mMessage mMachine Kit (Ambion, Austin, EE.UU.), utilizado para la transcripción in vitro. -mini Quick RNA Spin Columns, (Roche, Alemania), utilizado para purificar las ribosondas. -QIAprep Spin Miniprep Kit (QIAGEN, Stanford, EE.UU.), utilizado para purificar plasmidios desde bacterias. -QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN, Stanford, EE.UU.), utilizado para purificar, productos de PCR y de digestión desde geles de agarosa. -RNeasy Mini Kit (QIAGEN, Stanford, EE.UU.), utilizado para purificar RNA desde embriones. Enzimas: RNA polimerasas de Sp6, T3, T7, DNasa I (Ambion, Austin, EE.UU.); BamHI, EcoRI, EcoRV, XbaI, XhoI, HindIII, DNA polimerasaTaq (Boehringer Mannheim, Alemania);. T4 DNA ligasa, ScaI, ScaII, NcoI, NotI, ClaI (New England Biolabs, EE.UU.). DNA Polimerasa Taq, DNA Polimerasa Platinum, Superscript II, RNAseOUT (GIBCO BRL, California, EE.UU.). DNasa I (Ambion, Austin, EE.UU.) Otros reactivos usados en biología molecular: -Agarosa ultrapura (GIBCO BRL, California, EE.UU.). -Amortiguador de electroforesis TAE 1X (Tris-acetato/EDTA): tris-acetato 40mM, EDTA 1mM. -Amortiguador de PCR 10x con magnesio (Roche, Alemania). -Amortiguador de PCR 10x sin magnesio (Invitrogen, EE.UU.). 49
-Bromuro de Etidio (GIBCO BRL, California, EE.UU.). -dNTPs, deoxinucleotidos trifosfato (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) (Boehringer Mannheim, Alemania). -DTT 0,1 M (Invitrogen, EE.UU.). -1 Kb Plus DNA Ladder (Invitrogen, EE.UU.). -MgCl2 50mM (Invitrogen, EE.UU.). Cepas Bacterianas: -E. Coli INVαF’ (Invitrogen, San Diego, California, EE.UU.) -E. Coli DH5α (GIBCO BRL, California, EE.UU.) Medios de cultivo Bacteriano: -Medio Luria Bertani (LB): Triptona 1,0%, extracto de Levadura 0,5%, NaCl 1,0%, pH 7,0 ajustado con NaOH 5M. Autoclavado y almacenado a 4ºC. Adición opcional de ampicilina 50 μg/ml (Boehringer Mannheim, Alemania). -Medio LB solido (para cultivo de bacterias en placa): Medio LB más 15 g/L de agar antes de autoclave. -Medio LB solido/X-Gal/IPTG (para cultivo y selección de bacterias en placa): LB sólido más 40 μl, en la superficie de la placa, de una solución de X-Gal 40 mg/ml en dimetilformamida y 100μl de una solución 100 mM de IPTG. -Medio SOC: bactotriptona 20 g/l, extracto de levadura 5 g/l, glucosa 20mM, NaCl 10 mM, KCl 2,5 mM, MgSO4.7H2O 10 mM y MgCl2.6H2O 10 mM. 50
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Universidad de Chile, Facultad de M
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Quisiera agradecer muy especialment
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