Participación del Factor Silenciador Neuronal Restrictivo - Tesis ...

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no se observa represión de SCG10 y NFM que también poseen un RE-1 en su región reguladora (Paquette et al., 2000). Recientemente establecimos que XREST/NRSF se expresa tempranamente durante la neurogénesis en la región dorsal del embrión de Xenopus laevis, para posteriormente restringirse al sistema nervioso central del renacuajo. Mediante RT-PCR de neuronas espinales primarias aisladas, demostramos la coexpresión de XREST/NRSF y N-tubulin. La sobreexpresión de la isoforma humana causa la muerte de la totalidad de los individuos durante la gastrulación, fenotipo que es rescatado por la coexpresión de XREST-DBD. En tanto, la expresión de XREST-DBD resulta en el aparente silenciamiento de la expresión de los genes neuronales estructurales Nav1.2, N-tubulin y SCG10 (Armisen et al., 2002). Estos resultados contrastan notablemente con la función descrita para REST/NRSF y sugieren que esta proteína funcionaría como un activador, o al menos como un factor permisivo de la expresión de este tipo de genes. Ya que la inyección del mensajero de XREST-DBD en estadío de dos células conduce a la expresión de la proteína desde etapas tempranas del desarrollo, los fenotipos observados podrían ser el producto de perturbaciones en procesos previos a la diferenciación neuronal. En Xenopus, una de las estrategias experimentales empleadas para el estudio de la función de proteínas nucleares en etapas específicas del desarrollo embrionario, es la generación de quimeras compuestas por la proteína en cuestión, o de dominios de ésta, fusionada al dominio regulatorio del receptor de glucocorticoides (GR). Se ha descrito que estas fusiones una vez traducidas permanecen unidas a la hsp90 en ausencia de glucocorticoides y que el tratamiento con dexametasona de embriones inyectados con el mRNA que codifica para ellas, libera las fusiones proteicas de la hsp90 destinándolas al núcleo (Kolm et al., 1995). De esta manera, la expresión de una forma dominante negativa inducible que consta del dominio de unión a DNA de XREST/NRSF fusionado al GR (dnXREST), inducida en la blástula tardía resulta en una aparente expansión de la placa neural, en la expresión ectópica del canal de sodio Nav1.2 tanto en 41
tejido neural, como también en la placa neural expandida y en el silenciamiento de la expresión de N-tubulin (Olguín y Kukuljan, datos preliminares). Los antecedentes recopilados en ratón, pollo y Xenopus son compatibles con la idea de que REST/NRSF contribuye al proceso de diferenciación neuronal regulando la expresión de genes neuronales estructurales en los precursores neurales, y que además juega un papel importante durante el desarrollo embrionario temprano, el que puede incluir su participación en el establecimiento de la placa neural. 42
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