Participación del Factor Silenciador Neuronal Restrictivo - Tesis ...

RESULTADOS
1. Clonamiento del cDNA codificante para XREST/NRSF de
Xenopus laevis y Danio rerio.
Se aislaron cDNAs codificantes para los homólogos de REST/NRSF en
Xenopus laevis (XREST/NRSF) y Danio rerio (zREST/NRSF) mediante RT-
PCR. Para aislar XREST/NRSF se utilizó RNA total de embriones de Xenopus
de estadio de gástrula (10.5) y partidores diseñados en base a la secuencia de
un clon parcial correspondiente al extremo 5’ codificante de XREST/NRSF
(númerode acceso en genbank AF096301) y a la de un clon EST (XL066i17)
que codifica para el extremo carboxilo terminal y la región 3’ no traducida de
XREST/NRSF. Se aisló un producto de PCR único de 4503 pares de bases (pb)
que codifica para una proteína de 1501 aminoácidos de alta similitud a
REST/NRSF de mamíferos en el dominio de unión a DNA, que incluye los
primeros ocho dedos de zinc, y en los dominios corepresores: el de unión a
Sin3 en el extremo aminoterminal y el de unión a CoREST, en el carboxilo
terminal, donde se conserva el noveno dedo de zinc (Figura 14). En el caso de
zREST/NRSF se utilizó RNA total de embriones de 24 horas postfertilización y
partidores que fueron diseñados flanqueando la región codificante de
zREST/NRSF predicha a partir de la secuencia genómica anotada de Danio
rerio (www.ensembl.org) (Figura 14). Se obtuvo un producto de PCR único de
2565 pb que codifica para una proteína de 855 aminoácidos. Al igual que
XREST/NRSF, la proteína predicha conserva los nueve dedos de zinc y
presenta un alto grado de similitud en los dominios represores y de unión a
DNA de REST/NRSF (Figura 14). No se detectaron otras unidades
transcripcionales codificantes para proteínas similares a REST/NRSF mediante
el análisis del genoma de Danio rerio. Estos datos indican que tanto el genoma
de Xenopus laevis como el de Danio rerio, se encuentran presentes unidades
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