Participación del Factor Silenciador Neuronal Restrictivo - Tesis ...

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Moléculas inyectadas Genes Analizados dnXREST MoXREST Dex (+) st. 9 Dex (+) st. 12 SoxD 73% (n=79) 42% (n=36) 100% (n=22) Sox2 77% (n=51) 57% (n=21) 76% (n=21) Keratin 71% (n=52) 57% (n=21) 93% (n=14) msx-1 90% (n=29) 36% (n=44) 56% (n=16) Slug 82% (n=38) 66% (n=29) 63% (n=22) Tabla 6. Porcentaje de embriones con fenotipos asociados a la interferencia de la función de XREST/NRSF. Se muestra el porcentaje de embriones con expansión de los marcadores neurales SoxD y Sox2, con desplazamiento lateral e inhibición de la expresión de queratina epidermal, msx-1 y Slug. 79
4.2 La sobreexpresión de XREST/NRSF o de zREST/NRSF revierte los fenotipos asociados a la interferencia de la función de XREST/NRSF. La expansión del tejido neural y el desplazamiento lateral del ectodermo epidermal asociados a la activación de dnXREST en estadio de blástula tardía fueron revertidos parcialmente al coexpresar cantidades equimolares de dnXREST y del cDNA codificante para XREST/NRSF (Sox2 50%, n=24; keratin 51, n=20) (Figura 20). Junto con esto, los embriones coinyectados con estas moléculas y no expuestos a dexametasona no muestran alteraciones aparentes, lo que indica que la sobreexpresión de XREST/NRSF no conduce a defectos en la especificación del ectodermo (Figura 20). De manera semejante los efectos observados en los embriones inyectados con MoXREST o con dnXREST fueron rescatados por la coexpresión del cDNA codificante para zREST/NRSF (64%, n=28), el cual no contiene la secuencia contra la cual está dirigido el morfolino (Figura 20). La expresión de XREST/NRSF no revirtió el efecto de MoXREST (dato no mostrado), lo que confirma la especificidad del morfolino. Finalmente embriones inyectados con un morfolino control o con el mRNA de lacZ y tratados con dexametasona no presentan defectos (Figura 22). Estos resultados muestran que las estrategias utilizadas para interferir con la función de XREST/NRSF son específicas y que zREST/NRSF es funcional en Xenopus laevis. 80
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Universidad de Chile, Facultad de M
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Quisiera agradecer muy especialment
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