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Argomenti di ACTA otorhinolaryngologica italica 2009; 3: 59-60
Protocollo di valutazione clinico-molecolare
della rinosinusite cronica semplice o polipoide:
start up e revisione critica
M. Mantovani
Scuola di Specializzazione in ORL, Università di Ferrara
Razionale
La poliposi rinosinusale è considerata una complicanza
della rinosinusite cronica, quest’ultima definita come
“presenza di due o più sintomi, uno dei quali deve essere
la congestione nasale oppure la rinorrea anteriore e/o
posteriore associato a dolore facciale o riduzione/perdita
dell’olfatto per più di 12 settimane” 1 . L’incidenza della
sinusite cronica iperplastico-polipoide è stimata tra l’1 e il
4% nella popolazione generale e raggiunge percentuali più
alte in alcuni gruppi di pazienti, aumentando fino al 36%
nei pazienti con intolleranza all’acido acetilsalicilico, al
13% nei pazienti con asma bronchiale, al 5% nei pazienti
con asma allergico, al 20% nei pazienti con fibrosi cistica.
Nonostante i numerosi studi condotti sulla patogenesi della
poliposi naso-sinusale, non sono ancora noti i meccanismi
alla base della formazione dei polipi, anche se molte
teorie sono state ipotizzate.
Lo scopo della tesi è una valutazione interna di un protocollo
di studio ideato per caratterizzare il tipo di infiltrato
infiammatorio, l’espressione delle mucine secretorie,
il grado di attivazione dei fattori di trascrizione pro-infiammatori
ed il tipo e la funzionalità dei recettori per i
principali farmaci (anti-infiammatori, vasocostrittori ed
antisecretori) nei diversi fenotipi clinici della patologia rinosinusale
dell’adulto al fine di poter valutare l’esistenza
di una possibile eziologia e/o patogenesi comune fra asma,
patologie ostruttive polmonari e patologia rinosinusale. È
stato valutato criticamente il primo gruppo di 57 pazienti
entrato nel protocollo e sono state analizzate le procedure
e le modifiche per ottimizzare tale protocollo. Il progetto
di ricerca viene attuato in collaborazione con i colleghi del
Dipartimento di Medicina Clinica e Sperimentale, sezione
di Malattie dell’Apparato Respiratorio dell’Università di
Ferrara.
Materiali e Metodi
Il progetto di ricerca che viene analizzato è di tipo istituzionale
non farmacologico, approvato dal comitato
Etico locale, e richiede la selezione di 2 gruppi di circa
300 pazienti reclutati tra quelli afferenti presso gli
Ambulatori e la Clinica della Sezione di Otorinolaringoiatria
dell’Università di Ferrara, con le seguenti caratteristiche:
• pazienti di età superiore a 18 anni con rinosinusite cronica;
• pazienti di età superiore a 18 anni con rinosinusite cronica
complicata da poliposi rinosinusale.
Le caratteristiche che implicano l’esclusione dallo studio
sono:
• trattamento con glucocorticoidi sistemici e/o teofillina
per almeno un mese o farmaci immunosoppressori o
radio/chemioterapia nei 6 mesi precedenti l’intervento
chirurgico;
• etilismo e/o abuso di farmaci e droghe;
• gravidanza o allattamento;
• patologia psichiatrica che renda il soggetto incapace di
esprimere un consenso informato.
Ogni paziente viene caratterizzato dal punto di vista clinico,
funzionale e di imaging del massiccio facciale. Lo stato
atopico di ogni paziente verrà inoltre valutato tramite documentazione
preesistente oppure presso il Servizio di Allergologia
ed Immunologia Clinica dell’Università di Ferrara.
Qualora i sintomi evidenziati dal paziente siano suggestivi
per la presenza di una sindrome bronchiectasica, verrà
eseguita a scopo diagnostico una TC del torace ad alta risoluzione
senza contrasto e, qualora i sintomi evidenziati
dal paziente siano suggestivi per la presenza di un’asma
bronchiale, verrà eseguito, a scopo diagnostico, un test alla
metacolina in accordo con le Linee Guida internazionali
(Global Strategy for Asthma Management – GINA 2005).
La tipologia dell’intervento chirurgico (chirurgia endoscopica
funzionale dei seni paranasali – FESS; chirurgia
funzionale endoscopica – FES) verrà determinata dall’estensione
della patologia al momento della diagnosi
preoperatoria, dallo studio radiologico e dall’obiettività
intraoperatoria.
I prelievi verranno processati e messi in coltura per la ricerca
di miceti c/o il dipartimento di Medicina Sperimentale e
Diagnostica, sezione di Microbiologia, e dal Dipartimento
di Medicina Clinica e Sperimentale, sezione di Malattie dell’Apparato
Respiratorio, dell’Università di Ferrara. Inoltre,
dal tessuto rinosinusale, sia normale che patologico ottenuto
dalla resezione chirurgica, verranno prelevati da 2 a 4
campioni di tessuto di dimensioni sufficienti ad essere letti
istologicamente. Alcuni campioni verranno fissati con formaldeide
al 4%, in tampone fosfato salino (PBS) a pH 7,2
e, dopo la disidratazione, inclusi in paraffina, mentre altri
campioni di tessuto verranno immediatamente congelati in
azoto liquido, poi conservati a -80°C per le successive indagini
di biologia molecolare e genetica. Da questi pezzi di
tessuto rinosinusale saranno successivamente tagliate con il
microtomo piccole fettine e/o estratte le proteine totali e/o
gli acidi nucleici seguendo protocolli già validati 2 3 .
Successivamente verranno misurati: il tipo di cellule infiammatorie
presenti usando anticorpi specifici e metodiche
di immunoistochimica (IHC), il grado di proliferazio-
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