sodininkystė ir daržininkystė 25(4)

sodinukø (108 genotipai) lapuose. Ðiam tyrimui pagal motininiø medþiø fenotipinio
ávertinimo rezultatus buvo parinktos tokios miðke aptiktø obelø ðeimos: tipiðkos miðkinës
obels Nr. 3, miðkinës obels Nr. 22, kuri turëjo pagrindinio Malus domestica Borkh.
pirmtako – Malus sieversii (Ledeb.) M. Roem. – poþymiø, Nr. 18 bei Nr. 13, miðke
aptiktos kultûrinës kilmës obels Nr. 1, seniausios (~70 m. amþiaus) netikrojo branduolio
neturëjusios miðkinës obels Nr. 4 ir miðko gilumoje uþaugusios obels Nr. 23 ðeimos.
Motininë obelis Nr. 1 ir Nr. 3 auga Vaiðvydavos girininkijoje, Nr. 4 – Ðilënø, Nr. 13 –
Balskø, Nr. 18 – Stempliø, Nr. 22 – Lanèiûnavos ir Nr. 23 – Ðilinës girininkijoje. Miðkinës
obels skiriamieji poþymiai, kuriais vadovaujantis atrinkti motininiai medþiai, buvo
ðie: 2–2,5 cm ploèio vaisiai, rutuliðki arba plokðti, gelsvi, be dengiamosios spalvos arba
rausvaðoniai, vaiskoèio ir vaisiaus ilgiø santykis = 1, ûgliai ploni, trumpaûgliai baigiasi
dygliu (dygliaûgliai), pumpurai ir lapai pliki, lapø ilgis < 6 cm, plotis < 4 cm (Öåòòåðìàí,
1950, Ëèõîíîñ, 1963, Íîâèêîâ, 1965, Wagner, 1995 bei tyrimø medþiaga). Fenotipiniø
poþymiø ypatumai tipiðkose miðkinës obels radavietëse ávertinti pagal tyrimui parengtus
morfologiniø poþymiø deskriptorius (Petrokas, 2002).
Sodinukø lapø peroksidazës izofermentinës sudëties tyrimas atliktas LSDI Augalø
fiziologijos laboratorijoje 2004 m. liepos II deðimtadiená, nes nustatyta, kad peroksidazës
izoformø kiekis obelø lapuose kinta vegetacijos metu (Gelvonauskis, Ðikðnianienë,
2001), o daugiausia jø ir geriausias ryðkumas gelyje – liepos mënesá.
Ëminiø paëmimas ir paruoðimas. Lapø (4–6 lapas nuo ûglio virðûnës) ëminiai
paimti pirmoje dienos pusëje ir padëti á laboratorijos ðaldytuvà (anksti ryte, visi vienu
metu). Netrukus 0,25 g lapo audinio sutrinta trintuvëje ant ledo, pridëta 2 ml trisglicininio
buferio (pH 8,3), 0,015 g askorbo, 0,03 g glutamo rûgðties (izofermentams
stabilizuoti) ir 0,05 g polivinylpirolidono (fenoliniams junginiams „suriðti“ – mëginiams
iðgryninti). Obels lapø mëginiai centrifuguoti 4 min. 8000 aps./min. greièiu
kambario temperatûroje. Po to pridëta bromfenolo mëlynojo daþo (daþas parodo elektroforezës
pabaigà).
Elektroforetinis buferis. Tris-glicininis buferis (pH 8,3) – 2-amino-2-(hydroksimetyl)-1,3-propandiolio
(Tris) – 3 g, glicino – 14,4 g – praskiestas distiliuotu vandeniu
iki 500 ml. Naudotas tokios koncentracijos tirpalas: 100 ml buferio ir 900 ml
vandens.
Poliakrilamidinio gelio gamyba. Poliakrilamidinis nedenatûruojantis gelis ruoðtas
pagal Daviso (1964) metodikà. Koncentruojanèio gelio polimerizacija inicijuota apðvieèiant
tirpalà (riboflavinà) ultravioletiniø spinduliø lempa.
Elektroforezë vyko vertikalaus gelio aparate nuo katodo (-) link anodo (+),
srovë – 20 mA, átampa – 120V. Kai daþas pasiekdavo frakcionuojantá gelá, perjungta
40 mA srovë ir 220 V átampa. Px izoformos pasiþymi skirtingu elektrostatiniu krûviu,
todël elektriniame lauke juda skirtingu greièiu ir po tam tikrà laikotarpá trukusios
elektroforezës gelyje uþima skirtingas pozicijas.
Gelio daþymas. Peroksidazës (Px) izoformos elektroforegramose iðryðkintos
pagal modifikuotà Jaaska (1972) metodikà.
Pagal peroksidazës izoformø pozicijas, po elektroforezës iðryðkintas gelyje, elektroforegramose
buvo apskaièiuotas jø elektroforetinis mobilumas (dviem pakartojimais)
pagal formulæ Rf = r i
R -1 , kur: r i
– atstumas nuo frakcionuojanèio gelio pradþios
iki izofermento pozicijos; R – atstumas nuo skiriamojo gelio pradþios iki bromfenolio
mëlynojo juostos gelio apaèioje.
106