Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
alternatyvûs augalai ðeimininkai (Brunt <strong>ir</strong> kt., 1996; Edwardson, Chistie, 1997; Ðutic<br />
<strong>ir</strong> kt., 1999). Plaèiai paplitæ pomidoruose yra ðie v<strong>ir</strong>usai: pomidorø mozaikos (Tomato<br />
mosaic tobamov<strong>ir</strong>us), tabako mozaikos (Tobacco mosaic tobamov<strong>ir</strong>us), agurkø mozaikos<br />
(Cucumber mosaic cucumov<strong>ir</strong>us), bulviø X (Potato X potexv<strong>ir</strong>us) <strong>ir</strong> bulviø Y<br />
(Potato Y potyv<strong>ir</strong>us), o pietinëse Europos <strong>ir</strong> Amerikos ðalyse – pomidorø dëmëtojo<br />
vytulio (Tomato spotted wilt tospov<strong>ir</strong>us), pomidorø geltonø lapø garbanës (Tomato<br />
yellow leaf curl begomov<strong>ir</strong>us) <strong>ir</strong> pepino mozaikos (Pepino mosaic potexv<strong>ir</strong>us) v<strong>ir</strong>usai<br />
(Ðutic <strong>ir</strong> kt., 1999). Ypaè neigiamai pomidorø derliø veikia labai juose daþnos<br />
v<strong>ir</strong>usø kompleksinës infekcijos. Pagal pastebëtus pomidorø v<strong>ir</strong>usinës kilmës paþeidimus<br />
tiksliai nusakyti v<strong>ir</strong>uso rûðá yra sunku, nes simptomø iðraiðka gali bûti labai áva<strong>ir</strong>i.<br />
Áva<strong>ir</strong>ûs v<strong>ir</strong>usai tuose paèiuose augaluose gali sukelti vienodus simptomus. Tas pats<br />
v<strong>ir</strong>usas áva<strong>ir</strong>iø veisliø pomidoruose sk<strong>ir</strong>tingu nuo uþsikrëtimo pradþios metu gali pas<strong>ir</strong>eikðti<br />
sk<strong>ir</strong>tingais poþymiais. Gali klaidinti <strong>ir</strong> v<strong>ir</strong>usø miðinys. Todël sukëlëjams tiksliai<br />
identifikuoti naudotini tikslûs <strong>ir</strong> jautrûs metodai.<br />
P<strong>ir</strong>minë pomidoruose aptiktø kai kuriø v<strong>ir</strong>usø identifikacija atlikta mechaniðkai<br />
inokuliuojant augalus – indikatorius infekuotø pomidorø ekstraktais. Uþsikrëtusiø augalø<br />
spektras <strong>ir</strong> iðryðkëjæ simptomai juose leido preliminariai identifikuoti pomidorus<br />
paþeidusius v<strong>ir</strong>usus (Zitikaitë, 1999). Minëtas metodas yra labai imlus laiko <strong>ir</strong> darbo<br />
sànaudoms <strong>ir</strong> nelabai tikslus. Norint greièiau <strong>ir</strong> tiksliau nustatyti pomidorø v<strong>ir</strong>usiniø<br />
ligø sukëlëjus, yra atliekami v<strong>ir</strong>ionø morfologijos tyrimai perðvieèiamuoju elektroniniu<br />
mikroskopu <strong>ir</strong> v<strong>ir</strong>uso RNR fragmentø padauginimai atv<strong>ir</strong>kðtinës transkripcijospolimerazës<br />
grandininëse reakcijose, kombinuojant specifiniø oligonukleotidø poras,<br />
termostabilià DNR polimerazæ, taikant fragmentø denatûravimo, transkripcijos <strong>ir</strong> DNR<br />
sintezës besikartojanèius ciklus aukðtoje temperatûroje (Saiki <strong>ir</strong> kt., 1988).<br />
Darbo tikslas – patikimai identifikuoti pomidoruose aptiktus <strong>ir</strong> klasikiniais metodais<br />
preliminariai ávardytus kai kuriuos v<strong>ir</strong>usus, esant maþam jø titrui ar kompleksinei<br />
v<strong>ir</strong>usinei infekcijai, naudojant tikslius <strong>ir</strong> jautrius elektroninës mikroskopijos (EM)<br />
<strong>ir</strong> molekuliná polimerazës grandininës reakcijos (PGR) metodus.<br />
Tyrimo objektas <strong>ir</strong> metodai. V<strong>ir</strong>usiniø ligø paþeisti pomidorø ëminiai laboratoriniams<br />
tyrimams buvo surinkti privaèiuose darþuose <strong>ir</strong> ûkiuose, bandymø laukuose,<br />
botanikos sodø darþoviø kolekcijose áva<strong>ir</strong>iose Lietuvos vietovëse. Tyrimai buvo atliekami<br />
Fitov<strong>ir</strong>usø laboratorijoje <strong>ir</strong> jai priklausanèiame ðiltnamyje.<br />
Siekiant preliminariai nustatyti sukëlëjø gentá, iðlaikyti <strong>ir</strong> padauginti v<strong>ir</strong>usà, infekcijos<br />
buvo perneðtos á atitinkamus diagnostiniø augalø rinkinius mechaninës inokuliacijos<br />
bûdu.<br />
Kad bûtø nustatyta v<strong>ir</strong>usiniø ligø sukëlëjø daleliø morfologija (v<strong>ir</strong>ionø forma <strong>ir</strong><br />
dydis), t<strong>ir</strong>iant natûraliai infekuotø pomidorø ar d<strong>ir</strong>btinai v<strong>ir</strong>usais uþkrëstø diagnostiniø<br />
augalø lapø ar vaisiø nevalytus ekstraktus, naudotas perðvieèiamasis elektroninis<br />
mikroskopas (EM) JEOL JEM-100S. Instrumentinis didinimas – <strong>25</strong> 000 x (Dijkstra,<br />
de Jager, 1998). Preparatai EM buvo ruoðiami ant specialiø 2–3 mm skersmens tinkleliø,<br />
padengtø koloidine plëvele, kuri tv<strong>ir</strong>tinama anglimi. T<strong>ir</strong>iamoji medþiaga buvo<br />
ruoðiama ágramzdinimo bûdu <strong>ir</strong> kontrastuojama 2% uranilo acetato vandens t<strong>ir</strong>palu.<br />
Kad bûtø nustatyta molekulinë v<strong>ir</strong>uso rûðis, su PGR technika ið infekuotø pomidorø<br />
mëginiø buvo ekstrahuota <strong>ir</strong> iðvalyta ribonukleininë rûgðtis (RNR). Ið infekuotø<br />
pomidorø audiniø ji buvo iðsk<strong>ir</strong>iama pagal Y. Zhango <strong>ir</strong> kitø (Zhang <strong>ir</strong> kt., 1998)<br />
231
Change language