Download Abstractbuch (Freie Vorträge und Poster)

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

(D+EPO vs. D, p < 0,01). EPO normalisierte die durch Diabetes hochregulierte VEGF-A Expression in der diabetischen Retina. 6 Monate Diabetes reduzierte die Schichtdicke in der GCL um 25% (p < 0,05), in der INL um 19 % (p < 0,05), in der ONL um 20% (p < 0,001) und ganze Retina um 17% (p < 0,05). Die Neurodegeneration wurde durch EPO Behandlung vermindert (GCL 80%, p < 0,05; INL 45%, p < 0,05; ONL 83%, p < 0,001 und ganze Retina 83%, p < 0,05). Die Zellzahlen in GCL, INL und ONL wurden durch Diabetes reduziert (GCL 39%, p < 0,01; INL 15%, p < 0,01 und ONL 17%, p < 0,05) und durch EPO Behandlung verbessert (67% bei GCL (p < 0,05), 100% bei INL (p < 0,01) und 89% bei ONL (p < 0,05). Schlussfolgerung: EPO reduziert die diabetesbedingte Kapillarschädigung und ist neuroprotektiv. Die Normalisierung von retinalem VEGF-A könnte einen verminderter Bedarf an vaskuloprotektivem Überlebens-faktor bedeuten. FV66 Einfluss einer Neuronen-spezifischen Insulinrezeptor-Deletion auf die b-Amyloid-Akkumulation und die Letalität in einem Mausmodell für Morbus Alzheimer Stöhr O 1 , Leeser U 1 , Hettich MM 1 , Schilbach K 1 , Freude S 1 , Krone W 1 , Schubert M 1 1 Uniklinik Köln, Klinik II und Poliklinik für Innere Medizin und Zentrum für Molekulare Medizin Köln (ZMMK), Köln, Germany Fragestellung: Störungen der Glukose-Homöostase und/oder der Insulinrezeptor (IR)/Insulin-like Growth Faktor-1 Rezeptor (IGF-1R) Signaltransduktion sind mit neurodegenerativen Erkrankungen wie beispielsweise M. Alzheimer assoziiert. Die zugrunde liegenden pathophysiologischen Mechanismen sind jedoch unklar. Tg2576 Mäuse überexprimieren die schwedische Mutation des Amyloid-Precursor-Proteins (APP) und sind ein etabliertes Modell für M. Alzheimer. Diese Mäuse zeigen eine altersabhängige b-Amyloid(Ab)-Akkumulation sowie eine deutlich verkürzte Lebensdauer. In eigenen Vorarbeiten konnten wir zeigen, dass eine Neuronen-spezifische Deletion des IGF-1R in Tg2576 Mäusen diese vor ihrer vorzeitigen Mortalität schützt und die Ab Akkumulation reduziert. Die Rolle IR-vermittelter Signale ist in diesem Zusammenhang unklar und wird im vorliegenden Projekt untersucht. Methoden: Um die Auswirkungen einer verminderten neuronalen IR-Signaltransduktion zu untersuchen, wurde der IR in einem Mausmodell Neuronen-spezifisch deletiert (nIR -/- Mäuse) und diese Mäuse mit Tg2576 Mäusen gekreuzt. Die resultierenden Genotypen wurden über 60 Wochen metabolisch charakterisiert und bezüglich ihrer Lebenserwartung untersucht. Des Weiteren wurden mittels Western-Blot Analysen die Auswirkungen der neuronalen IR-Defizienz auf den APP Stoffwechsel in verschiedenen Hirnregionen untersucht. Ergebnisse: Da sich eine Hyperglykämie auf die Alzheimer-typischen Pathologien in Mausmodellen auswirken kann, haben wir den Glukosestoffwechsel detailliert untersucht. Es ergaben sich keine signifikanten Unterschiede in den Blutzuckerkonzentrationen bei nIR -/- , Tg2576 und nIR -/- Tg2576 Mäusen verglichen mit Wildtyp-Geschwistern. Ebenso zeigten sich keine Unterschiede in Glukose- und Insulintoleranztesten. Im Gegensatz zu neuronalen IGF-1R defizienten Tg2576 Mäusen hat die Deletion des Insulinrezeptors keine Auswirkung auf die vorzeitige Mortalität dieser Tiere. Um die Bildung von APP-Spaltprodukten bei diesen Tieren zu untersuchen, haben wir Western Blot Analysen mit Antikörpern gegen Ab und APP-CTF (C-terminale Fragmente) durchgeführt. Interessanterweise zeigten nIR -/- Tg2576 Mäuse beiderlei Geschlechts eine reduzierte Ab-Akkumulation sowie ein vermindertes Auftreten von a- undb-CTF (membrangebundene Produkte der proteolytischen APP-Spaltung durch die a- undb-Sekretase) verglichen mit Tg2576 Tieren. Schlussfolgerung: Im Gegensatz zu einer Neuronen-spezifischen Deletion des IGF-1R hat eine neuronaler Insulinrezeptor Knockout keinen protektiven Effekt auf die Sterblichkeit von Tg2576 Mäusen, obwohl ein neuronale Insulinresistenz die Ab-Akkumulation in Tg2576 Mäusen verringert. 45. Jahrestagung der Deutschen Diabetes-Gesellschaft | 12.–15. Mai 2010, Stuttgart FV67 Pigment epithelium-derived factor (PEDF) ist eines der abundantesten Proteine im Sekretom von humanen Adipozyten und induziert Insulinresistenz und inflammatorische Signalwege in Muskel- und Fettzellen Lamers D 1 , Famulla S 1 , Hartwig S 1 , Paßlack W 1 , Cramer A 1 , Horrighs A 1 , Lehr S 1 , Sell H 1 , Eckel J 1 1 Deutsches Diabetes-Zentrum, Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf, Institut für Klinische Biochemie und Pathobiochemie, Düsseldorf, Germany Fragestellung: PEDF gehört zur Familie der nicht-inhibierenden Serpine und ist ein multi-funktionales Protein mit neurotrophen und anti-angiogenen Eigenschaften. Seit kurzem ist bekannt, dass Typ 2 Diabetiker erhöhte PEDF Konzentrationen im Serum aufweisen. In Mäusen konnte gezeigt werden, dass die PEDF Expression im Fettgewebe positiv mit Adipositas und Insulinresistenz korreliert. Durch die Sekretionsanalyse von in vitro differenzierten humanen Adipozyten mittels 2D-PAGE und MALDI-MS konnten wir zeigen, dass PEDF eines der abundantesten Proteine im Sekretom der humanen Fettzelle ist. Ziel dieser Studie war es, die Regulation und autokrine Funktion von PEDF in humanen Adipozyten zu untersuchen und die parakrinen Effekte auf humane Skelettmuskelzellen (hSkMC) und glatte Muskelzellen (hSMC) zu bestimmen. Methodik: Aus subkutanem Fettgewebe von gesunden Patienten wurden Präadipozyten isoliert und in vitro zu Adipozyten differenziert. Fettzellkonditionierte Medien wurden über 48 h gesammelt und mittels 2D-PA- GE und MALDI-MS analysiert. Die Bestimmung der PEDF Konzentration erfolgte mithilfe von ELISAs. Expressions- und Phosphorylierungslevel wurden per Western Blot analysiert. Die proliferative Wirkung an hSMC wurde mittels BrdU Einbau in die DNA bestimmt. Ergebnisse: Humane Adipozyten sekretieren über 24 h ca. 50 ng/ml PEDF (350.000 Zellen), was im Vergleich zu Adiponectin, IL-6 oder IL-8 sehr hoch ist. Diese Sekretion ist signifikant höher als bei anderen primären Zellen wie Makrophagen (50-fach), hSkMC oder hSMC (5-fach). Sowohl die PEDF Expression, als auch die Sekretion steigen signifikant während der Adipogenese. Desweiteren konnten wir zeigen, dass TNF-a und Hypoxie (1% O2) die PEDF Konzentration in Adipozyten signifikant verringern. Die PEDF Sekretion kann signifikant mit Troglitazon und Hypoxie gesenkt und von Insulin erhöht werden. In Adipozyten und hSkMC induziert die Behandlung mit PEDF Insulinresistenz auf der Ebene der Akt Phosphorylierung. Diese war dosisabhängig und stärker in Adipozyten. Desweiteren aktivierte PEDF pro-inflammatorische Signalwege wie NF-kB. In hSMC steigerte PEDF die Proliferation (1,7-fach) und führte zur akuten Aktivierung von Signalwegen wie NF-kB, p38 MAPK und mTOR nach 10 min. Schlussfolgerung: PEDF ist eines der abundantesten Adipokine und wird durch Stimuli wie z.B. Hypoxie reguliert. PEDF induziert Insulinresistenz in Adipozyten und hSkMC und aktiviert inflammatorische Signalwege in hSMC. Aufgrund dieser vielfältigen Effekte ist PEDF ein äußerst relevantes Adipokin, welches im Zusammenhang mit Adipositas eine entscheidende Rolle bei Diabetes und kardiovaskulären Erkrankungen spielen könnte. FV68 Hsp60 reguliert die Sekretion von pro-inflammatorischen Entzündungsmediatoren und induziert Insulinresistenz in Skelettmuskelzellen Märker T 1 , Sell H 1 , Roden M 1 , Eckel J 1 , Habich C 1 1 Deutsches Diabetes-Zentrum an der Heinrich-Heine- Universität Düsseldorf, Düsseldorf, Germany Fragestellung: Die Entwicklung einer Adipositas führt durch verstärkte Freisetzung von Entzündungsmediatoren (EZM) im Fettgewebe zu chronischen Entzündungsprozessen, die über eine Insulinresistenz zu Typ 2 Diabetes führen können. Diese EZM können autokrin auf Adipozyten, aber auch endokrin auf andere Organe wirken. Die Signale, die zur Freisetzung von EZM aus Adipozyten führen, sind bislang weitgehend unbekannt. Das Hitzeschockprotein 60 (Hsp60), gilt hierbei als potentieller Kandidat. Daher war das Ziel, erstmals den Effekt von Hsp60 auf die Freisetzung von EZM aus humanen (Prä)-Adipozyten, sowie die Wirkung von Hsp60 auf humane Skelettmuskelzellen zu untersuchen. Methodik: Aus subkutanem Fettgewebe wurden Präadipozyten isoliert und in vitro zu Adipozyten differenziert. Die Hsp60-induzierte Freisetzung von EZM wurde mittels Multiplex-Beads-Verfahren untersucht. Die Spezifität der Hsp60-Bindung an humane Primärzellen wurde in Bindungsstudien analysiert und im FACS quantifiziert. In vitro differenzierte Skelettmuskelzellen wurden mit Hsp60 (5 – 20 mg/ml) behandelt und die Induktion verschiedener Signalwege untersucht. Ergebnisse: Die basalen Sekreti- Diabetologie & Stoffwechsel 2010; 5: S1–S106 Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York · ISSN 1861-9002 S23
S24 45. Jahrestagung der Deutschen Diabetes-Gesellschaft | 12.–15. Mai 2010, Stuttgart onsspiegel humaner Adipozyten betrugen für die EZM TNF-a 12,4 € 8,5 pg/ml, IL-8 0,4 € 0,8 ng/ml, IL-6 0,1 € 0 ng/ml, MCP-1 0,1 € 0,1 ng/ml und RANTES 115,2 € 142,4 pg/ml. Die Inkubation von primären, humanen (Prä)-Adipozyten mit Hsp60 führte zu einer konzentrations- und Reifungs-abhängigen Freisetzung aller untersuchten EZM. Mit Hsp60-stimulierte Präadipozyten sekretierten mehr TNF-a (bis 168,2 € 89,7-fach zur Mediumskontrolle) sowie mehr IL-8 (6,5 € 5,6-fach), als humane Adipozyten (bis 21,8 € 27,9-fach bzw. 2,6 € 1,7-fach). Gegenläufige Resultate konnten für die Freisetzung von IL-6 und MCP-1 gewonnen werden, da erhöhte Sekretionsspiegel nur bei reifen Adipozyten mit 31,7 € 8,6-fach (IL-6) bzw. bis 5,7 € 2,1-fach (MCP-1) gemessen wurden. RANTES hingegen wurde mit 8,5 € 7-fach (Präadipozyten) und 8,4 € 2,6-fach (Adipozyten) in vergleichbaren Mengen freigesetzt. Mittels Bindungsstudien an humanen Adipozyten konnte die Spezifität der Hsp60-Bindung gezeigt werden, da die Bindung durch den unmarkierten Liganden auf bis zu 31,3 € 6,8% reduziert werden konnte. Hsp60 aktivierte in humanen Skelettmuskelzellen pro-inflammatorische Signalwege und Stresskinasen. 20 mg/ml Hsp60 steigerten die Aktivierung von NFkB, JNK und ERK1/2 2 – 3-fach im Vergleich zur Kontrolle. Außerdem führte Hsp60 (5 – 20 mg/ml) zu Insulinresistenz auf Ebene der insulin-stimulierten Akt Phosphorylierung. Schlussfolgerung: Unsere Analysen konnten erstmals die Hsp60-mediierte Sekretion pro-inflammatorischer EZM aus humanen (Prä)-Adipozyten aufzeigen, die konzentrations- und Reifungs-abhängig verläuft. In Skelettmuskelzellen führte Hsp60 zur Aktivierung von pro-inflammatorischen Signalen und zu Insulinresistenz. Hsp60 könnte somit an Fettgewebsinflammation und Adipositas-assoziierten Stoffwechselstörungen beteiligt sein. Poster Postersitzung 9: Ergebnisse aus dem BMBF-Netzwerk Diabetologie P69 Affinität und Epitop-Spezifität von IA-2 Autoantikörpern bei Kindern mit Typ 1 Diabetes Risiko Krause SD 1 , Chmiel R 2 , Bonifacio E 3 , Ziegler AG 1,2 , Achenbach P 1,2 1 Forschergruppe Diabetes der Technischen Universität München, München, Germany, 2 Institut für Diabetesforschung der Forschergruppe Diabetes e.V, am Helmholtz Zentrum München, Neuherberg, Germany, 3 Center for Regenerative Therapies – Dresden Technische Universität Dresden, Dresden, Germany Fragestellung: Autoantikörper gegen Tyrosinphosphatase IA-2 (IA-2A), Insulin (IAA), Glutamat Decarboxylase (GADA) und Zink Transporter 8 (ZnT8A) sind charakteristische Immunmarker des Typ 1 Diabetes (T1D). Für IAA und GADA wurde gezeigt, dass die Progression des Autoimmunprozesses zur klinischen T1D-Manifestation mit dem Auftreten von hoch-affinen Antikörpern sowie spezifischen Epitop-Immunisierungsmustern assoziiert ist. In dieser Studie wurde untersucht, ob Zusammenhänge zwischen IA-2A Affinität und Epitopbindung bestehen, die auf eine Diabetesentwicklung bei IA-2A positiven Kindern hinweisen. Methodik: Von 50 Kindern mit familiärem T1D-Risiko aus der prospektiven BABYDIAB-Studie (mediane Beobachtungszeit 6,8 J.) wurde die erste verfügbare IA-2A positive Serumprobe untersucht (medianes Alter bei Serokonversion 3,5 J.). IA-2A positive Verlaufsproben standen von 30 Kindern zur Verfügung. Die IA-2A Affinität wurde mittels kompetitiver Radio-Bindungsassays mit 125 I-markiertem und unmarkiertem humanem IA-2ic bestimmt. Um die Epitope der IA-2A zu charakterisieren, wurde die Antikörperbindung gegen die IA-2 Konstrukte JM601 – 682, PTP682 – 979 und gegen das homologe Protein IA-2b gemessen. Ergebnisse: Zum Zeitpunkt des erstmaligen Auftretens von IA-2A war bei 49 (98%) Kindern bereits mindestens ein weiterer Autoantikörper (IAA, GA- DA, ZnT8A) im Serum nachweisbar. Die IA-2A Affinität variierte von 10 7 bis 10 11 L/mol (Median 5,5 x 10 9 ), und 41 (82%) Kinder wiesen eine Affinität > 1 x 10 9 L/mol auf. Hinsichtlich der Epitop-Spezifität bestanden initial keine signifikanten Unterschiede in der Affinität: 60% der IA-2A zeigten Reaktivität gegen die PTP Region von IA-2, 40% gegen die JM Region, 63% gegen IA-2b, und 56% waren gegen multiple Epitope gerichtet. Im Verlauf wiesen 17 Kinder konstant hohe (> 2,2 x 10 9 L/mol) und 5 Kinder konstant niedrige Affinitäten auf. Bei 8 Kindern war eine Reifung von niedrig- zu hoch-affinen IA-2A zu beobachten. In den Verlaufsproben war insbesondere eine Ausweitung der IA-2A Reaktivität gegen IA-2b und das Auftreten von hoch-affinen PTP-reaktiven IA-2A charakteristisch (Median 6,8 x 10 9 L/mol). Nur 3 Kinder entwickelten Diabetologie & Stoffwechsel 2010; 5: S1–S106 Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York · ISSN 1861-9002 keine PTP-Reaktivität (Median 3,8 x 10 8 L/mol; p = 0,009); darunter ein Kind mit JM-restringierten IA-2A, das keine multiplen Autoantikörper entwickelte. Bisher erkrankten 32 (64%) Kinder an T1D. Die IA-2A Affinität konnte das Diabetesrisiko nicht stratifizieren. Schlussfolgerungen: Die Ergebnisse bestätigen, dass ein Autoimmunprozess gegen verschiedene Inselantigene mit dem Auftreten hoch-affiner Autoantikörper assoziiert ist. Die Bestimmung der IA-2A Affinität bei Kindern mit bereits multiplen Autoantikörpern verbessert deshalb nicht die T1D-Prädiktion. Die Ausweitung der IA-2A Reaktivität gegen Epitope der PTP Regionen von IA-2 und IA-2b ist Merkmal einer reifen, T1D-relevanten Immunantwort. Gefördert durch BMBF „Kompetenznetz Diabetes mellitus“ (TREPPYD 01GI0806) sowie durch EU (DIAPREPP N202013) und JDRF (11 – 2005 – 1117). P70 STZ-geschädigte beta-Zellen induzieren Chemokinrezeptoren und Migration in humanen Telomerase-immortalisierten mesenchymalen Knochenmarksstammzellen (hMSC-TERT) in vitro Feilen PJ 1 , Päth G 1 , Dufner B 1 , van Loosen S 1 , Alt M 1 , Pilz I 1 , Seufert J 1 1 Uniklinik Freiburg, MED 2, Endokrinologie & Diabetologie, Labor B9, Freiburg, Germany Hintergrund: Adulte mesenchymale Knochenmarksstammzellen (MSC) können in verletzte Gewebe migrieren und angiogene, proliferative sowie immunmodulatorische Faktoren sezernieren. Diese Eigenschaften machen die Transplantation von MSC zu einem vielversprechenden zelltherapeutischen Verfahren in der Behandlung von Herzinfarkt und anderen degenerativen Erkrankungen. Im STZ-diabetischen Mausmodell mildern injizierte MSC die Blutzuckerwerte, wobei ihr Auftreten in geschädigten Pankreasinseln mit erhöhter Proliferation noch vorhandener beta-Zellen assoziiert ist. Diese Studie interessiert sich für die zellulären Interaktionen, welche die Migration von MSC an den Ort der Gewebeschädigung triggern. Fragestellung: Vor dem Hintergrund heterogener und schlecht definierter primärer MSC-Populationen war es das Ziel, mit der gut charakterisierten Zelllinie hMSC-TERT ein funktionelles in vitro-Modell zur Untersuchung zellulärer Interaktionen zwischen diabetisch geschädigten beta-Zellen und MSC zu etablieren. Ergebnisse: INS-1E wurden für 6 h mit 0 – 1 mM STZ vorbehandelt. Nach dem Wechsel auf Normalmedium wurden Inserts (Boyden Chamber mit Gelatine beschichteten 8 mm Poren) mit frisch ausgesäten hMSC-TERT in die Wells gestellt und nach 4 h Kokultur die Zahl der migrierten hMSC-TERT bestimmt. Als Hintergrundkontrolle diente Normalmedium mit 10% FBS in Well und Insert. Als Positivkontrolle diente ein Serumgradient: 40% FBS im Well versus 0% FBS im Insert. Beide Kontrollen enthielten keine beta-Zellen. Die basale Migration unbehandelter INS-1E beta-Zellen entsprach der Hintergrundkontrolle. ¾hnlich der Positivkontrolle steigerten mit 0,33 und 0,66 mM STZ vorbehandelte INS-1E die Zahl migrierter hMSC-TERT auf das 3fache. Bei noch höheren Dosierungen von STZ ging die Migration wieder leicht zurück (2fach bei 1 mM STZ). Im Vergleich zu INS-1E bewirkten Ratteninseln eine Verdoppelung der Migrationsrate in allen Versuchsgruppen inklusive den unbehandelten (0 – 1 mM STZ). Dies weist darauf hin, dass primäre Inseln stärkere Signale aussenden oder bereits durch Isolation und Kultur vorgeschädigt sind. Zur Charakterisierung der zellulären Interaktion untersuchten wir die Genexpression von bislang 19 Chemokinrezeptoren in hMSC-TERT und fanden 4 (CCR1, CCR7, CXCR3 and MET) nach Inkubation mit konditioniertem Medium von STZ vorbehandelten beta-Zellen stark hochreguliert. Dabei war die induzierte Genexpression abhängig von der verwendeten STZ- Konzentration. Schlussfolgerung: STZ-geschädigte beta-Zellen sezernieren chemoattraktive Faktoren, welche in hMSC-TERT Migration induzieren. hMSC-TERT können daher als definiertes in vitro Modell zur Untersuchung zellulärer Interaktionen mit beta-Zellen genutzt werden. Gefördert durch BMBF Kompetenznetz Diabetes mellitus (DLR 01GI0812)
Seite 1 und 2: www.thieme.de/diabetologie | www.th
Seite 3 und 4: S2 45. Jahrestagung der Deutschen D
Seite 11 und 12: S10 45. Jahrestagung der Deutschen
Seite 23: S22 45. Jahrestagung der Deutschen
Seite 75 und 76:
S74 45. Jahrestagung der Deutschen
Seite 77 und 78:
Seite 79 und 80:
Seite 81 und 82:
Seite 83 und 84:
Seite 85 und 86:
Seite 87 und 88:
Seite 89 und 90:
Seite 91 und 92:
Seite 93 und 94:
Seite 95 und 96:
Seite 97 und 98:
Seite 99 und 100:
Seite 101 und 102:
Seite 103 und 104:
S102 Namenverzeichnis | 45. Jahrest
Seite 105 und 106:
Seite 107:
Alle anzeigen

Download Abstractbuch (Freie Vorträge und Poster)

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?