Download Abstractbuch (Freie Vorträge und Poster)

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

Ph und HbA1c identische Tendenzen und Signifikanzen zwischen Baseline- und Behandlungsend-Werten (V5) wie für das Gesamtkollektiv. Die nüchtern TG sanken im V-Arm nach Behandlung im Vergleich zu P-Arm sign. (2,14 vs. 1,68; p < 0,05), die FFS 4 h pp stiegen sign. an (0,44 vs. 0,46, p < 0,05). NPG, FFS nüchtern, FFS pp, TG pp sowie pp PG nach 2 h und 4 h zeigten keine sign. Unterschiede zwischen V und P. HDL stieg sign. im V-Arm unter Behandlung an (0,9 vs. 1,1;p < 0,05). Schlussfolgerungen: Eine sign. Senkung der pp TG in der ITT-Analyse konnte durch Einnahme von max. 1,5 g rNS/Tag in unserer Studie nicht nachgewiesen werden. NPG und pp PG als Parameter der Glukosetoleranz zeigen in unserer Untersuchung bei Therapie mit max. 1,5 g rNS im Gegensatz zu anderen Studien keine sign. Verschlechterung bei sign. Nachweis bekannter anderer Nebeneffekte und der bekannten Therapieeffekte auf die Nüchtern-TG und HDL, welche sich bei einer Dosis von mindestens 1 g rNS/Tag sicher darstellen ließen. Der Anstieg der FFS 4 h pp deutet auf den schon in anderen Untersuchungen vermuteten Rebound-Effekt von NS hin. Postersitzung 27: Langerhans’sche Inseln P259 Glucagon induziert eine signifikante nukleäre Translokation von FOXO1, nachgewiesen mit einem neu entwickelten, hochsensitiven, GFP-FOXO1 basierten screening System Bumke-Vogt C 1 , Arafat A 2 , Osterhoff M 2 , Elkatry H 2 , Ziegenhorn A 1 , Bähr V 2 , Pfeiffer A 1,2 1 Deutsches Institut für Ernährungsforschung, Klinische Ernährung, Nuthetal, Germany, 2 CharitØ – Universitätsmedizin Berlin, Campus Benjamin Franklin, CC 10, Berlin, Germany Fragestellung: Welche Faktoren sind an Modulationen der intrazellulären Translokation von FOXO1 als Mediator u.a. in der Insulin Signaltransduktion beteiligt? Der Transkriptionsfaktor FOXO1 wird durch Insulin in der Signalkaskade terminal inaktiviert durch AKT/PKB-abhängige Phosphorylierungen, die zu einem nukleären Export und im Zytoplasma zur proteasomalen Degradation führen. FOXO1 aktiviert zentrale Gene der Gluconeogenese (PEPCK, G6Pase) bei Insulinresistenz oder niedrigen Insulinspiegeln. Der Transkriptionsfaktor ist bei zahlreichen zellulären Prozessen beteiligt und induziert bei kurzfristiger Aktivierung antioxidative, protektive Systeme, bei längerfristiger Aktivierung jedoch u. a. eine Störung der mitochondrialen Biogenese, eine Myosin-Schwerkettendegradation via Proteasom Pathway und zahlreiche andere nachteilige Reaktionen. Wir entwickelten deshalb einen sensitiven optischen Assay zur schnellen Analyse der zellulären Regulation von FOXO1. Material und Methoden: Humanes FOXO1 wurde als Fusionsprotein mit C-terminalem GFP kloniert und sowohl transient als auch permanent in verschiedene Zelllinien transfiziert. Nach Transfektion kam es zu einer ausgeprägten transienten Expression von FOXO1, das intranukleär und zytoplasmatisch lokalisiert war, was eine Analyse sowohl des Imports als auch des Exports aus dem Zellkern erlaubte. Stabile FOXO1-GFP exprimierende U2OS-Zellen wurden kloniert – mit überwiegend zytoplasmatischer Lokalisation -, die zur hochsensitiven Analyse des Imports geeignet waren. Ergebnisse: Die Stimulation von transfizierten U2OS- Zellen mit Insulin führte zu einem signifikanten Export von FOXO1, der dosisabhängig zwischen 10 – 1000 nmol/l Insulin darstellbar war. Eine Hemmung der PI3-Kinase mit LY-2940002 oder Wortmannin bedingte eine bis zu 3-fache dosisabhängige Zunahme des nukleären/zytoplasmatischen FOXO1 Quotienten. Glucagon induzierte einen hochsignifikanten nukleären Import bei einer Dosis von 50 nmol/l mit einem P-Wert = 0,00015. Schlussfolgerung: Ein nukleärer Import von FOXO1 durch Glucagon wurde bisher nicht beschrieben. Unser System erlaubt eine hochsensitive Analyse der Regulation von FOXO1 durch unterschiedliche Einflüsse einschließlich einer Dissektion der beteiligten Signalwege. 45. Jahrestagung der Deutschen Diabetes-Gesellschaft | 12.–15. Mai 2010, Stuttgart P260 Untersuchung der Auswirkung der mitochondrialen Atp8-Mutation im NOD und B6 Mausmodell auf Betazellfunktion und Diabetessuszeptibilität Weiss H 1 , Koch C 1 , Wester-Rosenloef L 1 , Ibrahim S 2 , Tiedge M 1 1 Universität Rostock, Institut für Med. Biochemie und Molekularbiologie, Rostock, Germany, 2 Universität Lübeck, Arbeitsgruppe Genetik, Lübeck, Germany Fragestellung: Die conplastischen Mausstämme B6mt FVB und NODmt FVB tragen eine mitochondriale Mutation im Atp8 Gen (Untereinheit 8 des ATP-Synthase-Komplexes). Es war das Ziel dieser Studie die Auswirkungen der Atp8 Mutation auf funktionelle Betazellparameter im autoreaktiven Hintergrund der NOD Maus und dem diabetesresistenten Hintergrund der B6 Maus zu untersuchen. Methodik: Der Sauerstoffverbrauch sowie ROS Produktion wurden an isolierten Mitochondrienfraktionen (Leber und Milz) mittels Oxymetrie und Amplex Red Assay bestimmt. Die ATPase Aktivität wurde photometrisch über ¾nderungen der NADH/NAD Ratio quantifiziert. Für die Untersuchung glucoseinduzierter Funktionsänderungen wurden isolierte Pankreasinseln für 24 h bei 30 mmol/l kultiviert. Als Funktionsparameter wurde die Glucoseresponsivität der Insulinsekretion (2,8 und 20 mmol Glucose) sowie die ATP/ADP-Ratio luminometrisch erfasst. Ergebnisse: Die NODmt FVB Mäuse zeigten eine signifikante Erhöhung der Diabetesinzidenz für weibliche (85% vs. 65%) und männliche (37% vs. 10%) Tiere. Im Sauerstoffverbrauch zeigten isolierte Mitochondrien von NODmt FVB Tieren eine signifikante Erhöhung unter State 3 und 4 Bedingungen im Vergleich zum NOD Stamm. Zwischen dem B6mt FVB und B6mt AKR Kontrollstamm konnten hingegen keine signifikanten Unterschiede in der mitochondrialen Respirationskontrolle nachgewiesen werden. NODmt FVB Mitochondrien hatten im Vergleich zum NOD Kontrollstamm eine erhöhte ATPase Aktivität. Sowohl NODmt FVB als auch B6mt FVB Tiere erzeugten mitochondrial signifikant höhere Mengen an H2O2 im Vergleich zu ihrer jeweiligen Kontrollgruppe (B6: 3,76 € 0,5 mM vs. 2,73 € 0,3 mM und NOD: 2,51 € 0,3 mM vs. 1,61 € 0,2 mM nach 30 min). Eine 24-stündige Exposition bei 30 mmol/l Glucose führte zu einer signifikant erniedrigten glucosestimulierten Insulinsekretion in isolierten Pankreasinseln von mt FVB Tieren (2,69 € 1,13 mg Insulin/ml pro 20 Inseln vs. 13,27 € 2,5 mg/ml pro 20 Inseln). Die ATP/ADP Ratio zeigte in Pankreasinseln nach Stimulation mit 2,8 und 20 mmol Glucose zwischen B6mt AKR und B6mt FVB Tieren keine signifikanten Unterschiede. Schlussfolgerung: Die Mutation des Atp8 Gens (ATP Synthase Untereinheit) bewirkt in den Mitochondrien einen signifikanten Anstieg der Produktion reaktiver Sauerstoffspezies. Dies führt trotz stabiler ATP/ADP Ratio und Respiration zu signifikanten Funktionsstörungen der Beta-Zellen nach Vorinkubation bei 30 mM Glucose sowie einer erhöhten Suszeptibilität gegenüber Autoimmuzerstörung auf dem NOD Hintergrund. Die Daten sprechen für eine kritische Betrachtung klassischer mitochondrialer Parameter des Energiestoffwechsels für die Beta-Zelldysfunktion und -zerstörung unter Bedingungen nutritiver Stoffwechselbelastungen P261 Effekte neuer Fettsäure-Rezeptor-Agonisten in insulinsezernierenden Zellen Pfleiderer M 1 , Liebscher K 1 , Ranta F 1 , Noack K 2 , Drews G 2 , Christiansen E 3 , Ulven T 3 , Häring HU 1 , Ullrich S 1 1 Universität Tübingen, Med. Klinik IV, Abteilung Endokrinologie, Diabetologie und Klinische Chemie, Tübingen, Germany, 2 Universität Tübingen, Pharmazeutisches Institut, Pharmakologie und Toxikologie, Tübingen, Germany, 3 University of Southern Denmark, Department of Physics and Chemistry, Odense, Denmark Während ein akuter Anstieg der Konzentration an freien Fettsäuren im Plasma die Glucose-induzierte Insulinsekretion potenziert, wirken chronisch erhöhte Fettsäurekonzentrationen hemmend auf die b-Zellfunktion und stimulieren den apoptotischen Zelltod. Bei der Stimulation der Insulinsekretion spielt der Fettsäurerezeptor (GPR40/FFAR1) eine entscheidende Rolle. Fehlt der Rezeptor oder ist er gehemmt, können Fettsäuren die Insulinsekretion nicht mehr stimulieren. Die apoptotische Wirkung hingegen scheinen Fettsäuren über metabolische Signalwege auszuüben. Diese Studie wurde durchgeführt, um zu untersuchen, welche Wirkung spezifische FFAR1-Agonisten auf die Insulinsekretion und den apoptotischen Zelltod in insulinsezernierenden Zellen haben. Es wurde zudem untersucht, ob FFAR1-Agonisten in Zellen wirksam sind, die ihre Glucosesensitivität verloren haben. INS-1E Zellen und humane Inseln wurden mit synthetischen niedermolekularen Agonisten Diabetologie & Stoffwechsel 2010; 5: S1–S106 Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York · ISSN 1861-9002 S87
S88 45. Jahrestagung der Deutschen Diabetes-Gesellschaft | 12.–15. Mai 2010, Stuttgart (TUG422 und TUG469) des FFAR1 bzw. mit Palmitat oder Oleat stimuliert und das sezernierte Insulin radioimmunologisch bestimmt. Die zytosolische Ca 2+ -Konzentration wurde mit dem Fluoreszenzfarbstoff Fura-2 gemessen. Der apoptotische Zelltod wurde immunhistologisch (cleaved Caspase3) nach 2-tägiger Kultur in Anwesenheit von 10 mM TUG469 oder von 50 mM Palmitat analysiert. In INS-1E Zellen stimulierten sowohl Palmitat als auch Oleat die Insulinsekretion bei 12 mM Glucose aber nicht bei 2,8 mM Glucose. TUG469 erhöhte die Sekretion um 25% ebenfalls nur in Anwesenheit von 12 mM Glucose. Der Agonist stimulierte die Sekretion auch signifikant in Glucose-insensitiven INS-1E Zellen. In humanen Inseln steigerte TUG469 die Insulinausschüttung um 50% sowohl bei niedriger als auch bei hoher Glucose. In Glucose-sensitiven INS-1E Zellen löste 12 mM Glucose Ca 2+ -Oszillationen aus. TUG469 erhöhte die Glucose-induzierten Ca 2+ -Oszillationen. In Glucoseinsensitiven Zellen hatte 12 mM Glucose keinen Effekt auf [Ca 2+ ]i. Unter diesen Bedingungen erhöhte TUG469 die zytosolische Ca 2+ Konzentration geringfügig aber signifikant. Während Palmitat Apoptose induzierte, hatten FFAR1-Agonisten keinen Effekt auf den Zelltod. Diese Ergebnisse zeigen, dass der FFAR1 ein therapeutisches Target für die Behandlung von Insulinsekretionsstörungen beim Menschen darstellen könnte, da spezifische niedermolekulare Agonisten des Rezeptors die Insulinsekretion steigern, aber keine Apoptose auslösen. P262 Regulation der Proliferation Insulin-sezernierender Zellen durch PKCd Theilig D 1 , Leveringhaus J 1 , Ranta F 1 , Handrick R 2 , Jendrossek V 2 , Lammers R 1 , Häring HU 1 , Ullrich S 1 1 Universität Tübingen, Med. Klinik IV, Abteilung Endokrinologie, Diabetologie und Klinische Chemie, Tübingen, Germany, 2 Klinik für Radioonkologie, Tübingen, Germany Die Protein Kinase C delta (PKCd) ist ein pro-apoptotisches Enzym, welches für die Fettsäure- und Zytokin-induzierte Apoptose von Insulin-sezernierenden Zellen verantwortlich gemacht wird. Proliferierende INS-1E Zellen, die permanent eine PKCd exprimieren, welche wegen einer Mutation in der ATP-bindenden Domäne keine Kinaseaktivität mehr besitzt, zeigen ein verzögertes Wachstum. Mit dieser Studie wurde der Mechanismus untersucht, über welchen PKCd Zellwachstum beeinflusst. INS-1E Zellen wurden stabil mit einer Wildtyp PKCd (WT) oder einer mutierten PKCd, die keine Kinaseaktivität besitzt (KN), transfiziert. Das Zellwachstum wurde unter Standardkulturbedingungen untersucht und die Zellzahl mittels einer Neubauerzählkammer bestimmt. Der Zellzyklus wurde nach DNA-Anfärbung mit Propidiumiodid anhand der Nicoletti-Methode über FACS (Fluorescence activated cell sorting) gemessen. Die Expression von Zellzyklusproteinen und deren Phosphorylierungszustand wurden mit Western Blotting und ihre zelluläre Verteilung immunhistochemisch mit konfokaler Mikroskopie analysiert. Die Überexpression von WT-PKCd beschleunigt das Zellwachstum, während KN-PKCd-exprimierende Zellen sich langsamer vermehren. Die Zellzyklusanalyse ergab, dass 60% der Kontroll INS-1E Zellen sich in der G1-Phase befinden, während nur 30% den doppelten Chromosomensatz der G2-Phase aufweisen. Eine ähnliche Zellzyklusverteilung zeigen auch WT-PKCd-überexprimierende Zellen, während KN-PKCd-überexprimierende Zellen in G2 akkumulieren und nur 1% der Zellen in G1 zu finden sind. Wird die mitotische Zellteilung durch Colchicin gehemmt, kommt es auch in den Kontroll INS-1E Zellen und den WT-PKCd INS-1E Zellen zu einer Akkumulation in G2. Während KN-PKCd INS-1E Zellen nach Behandlung mit Colchicin vermehrt polyploid werden, sind WT-PKCdüberexprimierende Zellen vor Polyploidie geschützt. Die Analyse des Western Blots von Zellzyklus-regulierenden Proteinen ergab keine signifikanten Unterschiede in der Expression und Phosphorylierung von cdk-1. Interessanterweise befindet sich das hemmende Zellzyklusprotein p21 in WT-PKCd Zellen im Zytosol, während in KN-PKCd-überexprimierenden Zellen p21 im Zellkern akkumuliert. Diese Beobachtungen lassen den Schluss zu, dass PKCd über die Regulation der zellulären Verteilung von p21 die Proliferation von Insulin-sezernierenden Zellen beeinflusst. Dieser Mechanismus könnte bei der Regulation der b-Zellmasse eine Rolle spielen. P263 Zytoprotektion und Erhalt der Insulinsekretion durch PGIS Überexpression in insulinproduzierenden Zellen Gurgul-Convey E 1 , Hanzelka K 1 , Lenzen S 1 1 Medizinische Hochschule Hannover, Institut für Klinische Biochemie, Hannover, Germany Fragestellung: Typ-1 Diabetes ist eine Autoimmunerkrankung, die durch graduellen Verlust der pankreatischen Beta-Zellen charakterisiert ist. Deshalb besteht ein großer Bedarf, neue Schutzmethoden für pankreatische Inseln zu entwickeln. Da beobachtet wurde, dass Prostacyclinanaloga Inseln vor verschiedenen Stressoren schützen können, haben wir die Bedeutung intrazellulärer Überexpression von Prostacyclinsynthase in insulin-produzierenden Zellen untersucht. Methodik: Verschiedene Gewebe wurden von Wistar-Ratten isoliert. Ratteninseln und insulinproduzierende INS 1E Zellen wurden mit IL-1b 600 U/ml oder mit einem Zytokinmix (IL-1b 60 U/ml, TNFa 185 U/ml und IFNg 14 U/ml) inkubiert. Die folgenden Methoden wurden benutzt: RNA Isolierung nach Chomczynski, Real-Time PCR, stabile Transfektion (pcDNA3-hPGIS), SEAP Reporter Genassay, MTT Assay, Proliferationsassay, Griess Assay, RIA für Insulinmessung. Ergebnisse: Die Expression von PGIS in pankreatischen Inseln und insulinproduzierenden INS 1E Zellen ist sehr gering (ca. 5 und 1% im Vergleich zur Expression in der Leber). Die PGIS Genexpression in pakreatischen Inseln war nach einer Zytokininkubation verringert (24 h IL-1 38 € 18%, Zytokinmix 29 € 11%, vs. unbehandelte Kontrolle 100%, p < 0,05). Die Überexpression von humaner PGIS in INS 1E Zellen schützte gegenüber Zytokintoxizität (MTT Assay nach 24 h: INS 1E: IL-1 59 € 3, Zytokinmix 12 € 1; INS 1E-PGIS IL-1 81 € 1, Zytokinmix 29 € 9%). Auch die Proliferationrate war bei INS 1E-PGIS Zellen nach einer 24 h Inkubation mit Zytokinen deutlich höher als bei Kontrollzellen (INS 1E, IL-1 72 € 3, Zytokinmix 33 € 2; INS 1E-PGIS, IL-1 82 € 3, Zytokinmix 64 € 4%). Die zytokininduzierte NFkB Aktivierung war niedriger nach der PGIS Überexpression in INS 1E Zellen (NFkB Aktivierung nach 24 h: INS 1E, IL-1 8-fache, Zytokinmix 6-fache Erhöhung, vs. INS 1E-PGIS, IL-1 2-fach, Zytokinmix 1,2-fach erhöht). Zudem war die zytokininduzierte Nitrit-Produktion in INS 1E-PGIS Zellen gehemmt. Die INS 1E-PGIS Zellen zeigten eine bessere glucoseinduzierte Insulinsekretion als Kontrollzellen (nach Inkubation mit 30 mM Glc, INS1E 273 € 24 vs. INS 1E-PGIS 667 € 101%). Interessanterweise schützte die Überexpression von PGIS auch gegen eine durch Zytokine verursachte Hemmung der glucoseinduzierte Insulinsekretion (30 mM) (nach einer 24 h Inkubation mit Zytokinen, INS 1E: IL-1 48 € 3, Zytokinmix 40 € 4; INS 1E-PGIS: IL-1 109 € 32, Zytokimix 96 € 21%). Schlussfolgerungen: Die Prostacyclin Synthase Überexpression könnte möglicherweise als eine neue Schuztstrategie gegenüber Zytokintoxizität genutzt werden. P264 Diabetologie & Stoffwechsel 2010; 5: S1–S106 Georg Thieme Verlag KG Stuttgart · New York · ISSN 1861-9002 Genotyp-spezifische phänotypische und pathomorphologische Charakteristika eines neuen Mausmodells für MODY 2/PNDM van Bürck L 1 , Schuster M 1 , Pichl L 1 , Wolf E 2 , Aigner B 2 , Wanke R 1 , Herbach N 1 1 Institut für Tierpathologie, Ludwig-Maximilians- Universität München, München, Germany, 2 Lehrstuhl für Molekulare Tierzucht und Biotechnologie, Ludwig- Maximilians-Universität München, München, Germany Fragestellung: Im Rahmen des Münchener ENU Mausmutagenese Projektes generierte mutante Mauslinien stellen wertvolle Modelle für die Untersuchung von Krankheitsformen wie dem humanen Diabetes mellitus dar und bieten die Möglichkeit der Identifikation neuer Diabetesassoziierter Kandidatengene. Bei einer dieser mutanten Mauslinien wurde eine Punktmutation im Glucokinase (Gck) Gen identifiziert, die zu einem Aminosäurenaustausch von Asparaginsäure zu Valin an Position 217 führt (Munich Gck D217V Mutante). In der vorliegenden Studie wurde diese Mauslinie hinsichtlich der funktionalen, klinischen und pathomorphologischen Konsequenzen der Mutation charakterisiert. Methodik: Klinische und pathomorphologische Untersuchungen von Munich Gck D217V Mutanten und Wildtyp-Wurfgeschwistern verschiedener Lebensaltersstufen wurden auf dem genetischen Hintergrund des Inzuchtstammes C 3 H durchgeführt. Ergebnisse: Funktional manifestiert sich die Mutation in einer reduzierten Glucokinase-Enzymaktivität, charakterisiert durch eine bei heterozygoten Mutanten um 33%, bei homozygoten Mutanten um 84% reduzierte Vmax und eine erhöhte S0,5 für Glukose. Die Glucokinase-Proteinmenge in den Pankreasinseln von Mutanten war vergleichbar mit Wildtyptieren. Heterozygote Mutanten zeigten einen milden, dem MODY 2 des Menschen ähnlichen diabetischen Phä-
Seite 1 und 2:
www.thieme.de/diabetologie | www.th
Seite 3 und 4:
S2 45. Jahrestagung der Deutschen D
Seite 5 und 6:
Seite 7 und 8:
Seite 9 und 10:
Seite 11 und 12:
S10 45. Jahrestagung der Deutschen
Seite 13 und 14:
Seite 15 und 16:
Seite 17 und 18:
Seite 19 und 20:
Seite 21 und 22:
Seite 23 und 24:
Seite 25 und 26:
Seite 27 und 28:
Seite 29 und 30:
Seite 31 und 32:
Seite 33 und 34:
Seite 35 und 36:
Seite 37 und 38: S36 45. Jahrestagung der Deutschen
Seite 87: S86 45. Jahrestagung der Deutschen
Seite 103 und 104: S102 Namenverzeichnis | 45. Jahrest
Seite 105 und 106: S104 Namenverzeichnis | 45. Jahrest
Seite 107: S106 Namenverzeichnis | 45. Jahrest
Alle anzeigen

Download Abstractbuch (Freie Vorträge und Poster)

Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.

Template löschen?

Als Template speichern?