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4 Diskussion
auf.
4.10 Elektrophysiologische Eigenschaften der rauen Mikrosomen
aus Canis familiaris und Saccharomyces cerevisiae im
Vergleich
Im Rahmen der vorliegenden Arbeit wurde neben dem Sec61-Kanal der RM-Präpara-
tionen aus C. familiaris auch die Kanalaktivität aus rauen Mikrosomen aus S. cerevisiae
in ihren grundsätzlichen elektrophysiologischen Eigenschaften charakterisiert.
Übereinstimmend konnten beide Proben erst nach Mega 9-vermittelter Veränderung
der Lipidkomposition der Mikrosomenmembran und nachfolgender Depletion der Ri-
bosomen mit Puromycin, GTP und KCl mit dem planaren Bilayer fusioniert werden
(3.1.1; 3.2.1). Kontrollexperimente haben gezeigt, dass weder das für die Herstellung
des planaren Bilayers verwendete L-α-PC Typ IV-S noch das für die Modifikation der
Lipidzusammensetzung verwendete L-α-PC oder das dabei eingesetzte Mega 9 mit po-
renbildenden Proteinen kontaminiert waren. Des Weiteren fungiert Puromycin auch in
Anwesenheit von GTP nicht als Ionophor (3.1.1). Entsprechend kann die beobachtete
Kanalaktivität in den Hefe-Mikrosomen einer cotranslationalen, Ribosomen-assoziierten
Translokonkonfiguration, dem Sec61p-, dem homologen Ssh1p- oder dem SEC’-Komplex
zugeordnet werden (siehe 1.2.2). Der posttranslationale SEC-Komplex war in den un-
tersuchten Proben nicht vorhanden oder lag ausschließlich im geschlossenen Zustand
vor.
Das Schaltverhalten der Kanalaktivität aus S. cerevisiae ist nicht von dem des Sec61-
Kanals aus C. familiaris zu unterscheiden. Beide zeigen eine Vielzahl an unterschied-
lichen Stromniveaus und eine hohe Variabilität der entsprechenden Schaltfrequenzen,
ein energetisch bevorzugter Hauptoffenzustand kann nicht identifiziert werden. Koope-
rative Schaltereignisse über alle Unterniveaus hinweg vom vollständig geöffneten zum
geschlossenen Zustand sind hingegen häufig zu beobachten. Übereinstimmend lassen
sich die Leitwerte im jeweiligen Häufigkeitshistogramm in zwei Klassen einteilen. Die
Hauptleitwerte ergeben sich aus den Maxima der Gaußanpassungen mit 151 pS ± 2 pS
(C. f.) und 209 pS ± 2 pS (S. c.), während die Unterleitwerte bei 480 pS ± 19 pS (C.
f.) und 596 pS ± 10 pS (S. c.) liegen (250 mM KCl, 10 mM Mops/Tris pH 7). Die
mittleren Leitwerte sind somit für den Kanal aus S. cerevisiae im Vergleich mit dem
Sec61-Komplex aus C. familiaris um 20-30 % erhöht. Weiterhin ist für beide Kanalak-
tivitäten ein Leckstrom charakteristisch, ein vollständiges Schließen der Kanäle bis auf
0 pA tritt nicht auf.
Aus den Leitwerten ergeben sich für die Abschätzung des Porendurchmessers nach Hille
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