b a c - repOSitorium - Universität Osnabrück

3 Ergebnisse
Abbildung 3.10: Ergebnisse der Coflotationsexperimente mit Calmodulin
a: Flotation mit aufgereinigtem Sec61-Komplex in Anwesenheit von freiem Calcium.
b: Flotation mit aufgereinigtem Sec61-Komplex, freies Ca 2+ mit EGTA komplexiert.
c: Kontrollexperiment mit aufgereinigtem SecYEG-Komplex aus E. coli.
d: Kontrollexperiment mit aufgereinigtem Tom40 aus S. cerevisiae.
WB = Westernblot.
SecYEG-Komplex (Abbildung 3.10 c,d) oder mit Protein-freien Liposomen (Daten nicht
gezeigt) beobachtet werden. Das lösliche Protein verbleibt in den Gradientenfraktionen
mit hoher Dichte.
3.1.10.2 Elektrophysiologische Ergebnisse
Es sollte untersucht werden, ob und wie Calmodulin die elektrophysiologischen Cha-
rakteristika des Sec61-Kanals beeinflusst. Dazu werden Messergebnisse vor und nach
Zugabe von Calmodulin miteinander verglichen.
Abbildung 3.11 a zeigt die typische Stromableitung eines Sec61-Einzelkanals aus RM-
Präparationen in Anwesenheit von freiem Calcium unter symmetrischen Elektrolytbe-
dingungen (100 mM KCl, 13 mM CaCl2, 10 mM Mops/Tris pH 7) vor und nach Zugabe
von 500 nM Calmodulin beidseitig des Bilayers. Nach CaM-Zugabe nehmen die Einzel-
kanalströme deutlich ab, es ist ein fast vollständiges Schließen des Kanals zu beobachten
(Abbildung 3.11 b). Besonders zu erwähnen ist, dass der für alle Proben des Translokons
charakteristische Leckstrom in Anwesenheit von CaM nicht mehr auftritt. Das Schalt-
verhalten ist durch kurze dwelltimes gekennzeichnet, die auftretenden Schaltereignisse
zeigen fast ausschließlich Leitwerte von unter 200 pS und können bei einer Sampling-
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