b a c - repOSitorium - Universität Osnabrück

Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Aufbau und Funktion des Endoplasmatischen Retikulums . . . . . . . . . 1
1.2 Die Protein-Translokase des Endoplasmatischen Retikulums: Der Sec61-
Komplex . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
1.2.1 Targeting der Präproteine an die ER-Membran . . . . . . . . . . 3
1.2.2 Der cotranslationale Transport . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
1.2.3 Der posttranslationale Transport . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
1.2.4 Modifikationen der Proteine nach abgeschlossener Translokation . 9
1.3 Das Endoplasmatische Retikulum als intrazellulärer Calciumspeicher . . 9
1.3.1 Translokon-vermittelter Calcium-Ausstrom aus dem ER-Lumen . 10
1.4 Calmodulin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
1.5 Zielsetzung der vorliegenden Arbeit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
2 Material und Methoden 16
2.1 Verwendete Proben . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
2.1.1 Proben des Translokon-Komplexes aus Canis familiaris . . . . . . 16
2.1.1.1 Raue Mikrosomen, RM . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
2.1.1.2 Puromycin-Kalium gewaschene raue Mikrosomen, PKRM 16
2.1.1.3 Proteoliposomen mit aufgereinigtem Sec61-Komplex . . 16
2.1.2 Proben des Translokon-Komplexes aus Saccharomyces cerevisiae . 18
2.1.2.1 Raue Mikrosomen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
2.1.3 Weitere Proben . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18
2.1.3.1 Ubiquitin conjugating enzyme 6, Ubc6 . . . . . . . . . . 18
2.1.3.2 Preprocecropin A, PPcecA . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
2.1.3.3 Calmodulin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
2.1.3.4 Ribosomen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
2.1.3.5 Tom40 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
2.1.3.6 SecYEG-Komplex . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
2.2 Biochemische Methoden . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
2.2.1 Flotation im Dichtegradienten . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
2.2.2 Proteinfällung mit Trichloressigsäure . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2.2.3 SDS-Gelelektrophorese . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2.2.4 Detektion gelabelter Proteine im Polyacrylamidgel . . . . . . . . . 21
2.2.5 Anfärbung der Proteine im Polyacrylamidgel . . . . . . . . . . . . 21
2.2.6 Westernblot . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
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