b a c - repOSitorium - Universität Osnabrück

3.1 Charakterisierung des Sec61-Komplexes aus Canis familiaris
den planaren Bilayer ausgegangen werden. Der Effekt ist nach vorheriger Zugabe auf
der nicht-bindenden Seite erst nach Zupipettieren in das andere Messkompartiment
für beide Spannungsvorzeichen nachweisbar. Eine Seitenspezifität für die Bindung von
Calmodulin an den Sec61-Komplex kann somit postuliert werden.
Um die Bindungsstelle am Translokon einzugrenzen wurde der Versuch mit dem aufge-
reinigten Sec61-Komplex wiederholt (Abbildung 3.13 c). Die Ergebnisse sind nicht von
denen aus Experimenten mit rauen Mikrosomen zu unterscheiden. Die Bindestelle für
CaM ist damit auf der α-, β- oder γ-Untereinheit des Sec61 lokalisiert.
Kontrollexperimente mit Strom-Spannungsrampen bestätigen, dass eine symmetrische
Zugabe von Calmodulin in Abwesenheit von freiem Calcium keinen Einfluss auf den
Offenzustand des Sec61-Kanals hat (Abbildung 3.14 a). Wird in Anwesenheit von CaM
und EGTA allerdings CaCl2 in einer Konzentration zugegeben, die die Bindekapazität
des EGTAs für Ca 2+ -Ionen übersteigt, so kommt es zu einem Schließen des Kanals
(Abbildung 3.14 b). Dieses verifiziert nochmals die strikte Abhängigkeit des Calmodulin-
Effektes von der Anwesenheit freier Calciumionen.
Abbildung 3.14: Strom-Spannungsrampen des Sec61-Kanals in Anwesenheit von Calmodulin
a: Strom-Spannungsrampen eines RM-Kanals vor (schwarz) und nach (rot) Zugabe von
500 nM CaM cis und trans in 100 mM KCl, 10 mM EGTA, 10 mM Mops/Tris pH 7.
b: Strom-Spannungsrampen des RM-Kanals in 100 mM KCl, 10 mM EGTA, 10 mM
Mops/Tris pH 7, 500 nM CaM cis und trans vor (schwarz) und nach (rot) Zugabe von
26 mM CaCl2 cis und trans.
Insgesamt kam es bei 51 % der im Rahmen dieser Arbeit aufgenommenen Strom-
Spannungsrampen mit RM-Präparationen unter symmetrischen Elektrolytbedingungen
in Anwesenheit freier Ca 2+ -Ionen nach Zugabe von CaM zu einem deutlichen Rückgang
des detektierten Stromes. Für weitere 30 % der Ergebnisse konnte ein fast vollständiger
Block der Pore für Ionen (siehe Abbildung 3.13 a) festgestellt werden.
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