b a c - repOSitorium - Universität Osnabrück
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2 Material und Methoden<br />
2.1.2 Proben des Translokon-Komplexes aus Saccharomyces cerevisiae<br />
2.1.2.1 Raue Mikrosomen<br />
Die Präparation der rauen Mikrosomen aus S. cerevisiae geschah nach Panzner et al.<br />
(1995). Die Liposomen enthielten alle an der Proteintranslokation der Hefe beteiligten<br />
und translokonassoziierten Proteinkomponenten, den Sec61p-Komplex (Sec61p, Sbh1p<br />
und Sss1p), den Ssh1p-Komplex (Ssh1p, Sbh2p und Sss1p), Sec62p, Sec63p, Sec71p,<br />
Sec72p, SRP und SRP-R sowie den TRAP-Komplex und die OST. Sowohl der Sec61p-<br />
Komplex als auch der Ssh1p-Komplex waren in diesen Präparationen mit cytosolischen<br />
Ribosomen mit undefinierten naszierenden Polypeptidketten assoziiert. Die Proben la-<br />
gen in Saccharose-Puffer (250 mM Saccharose, 20 mM Hepes/KOH, pH 7,4, 50 mM<br />
KAc und 1 mM DTT) vor.<br />
Abbildung 2.2: Am Proteintransport beteiligte Membrankomponenten der rauen Mikrosomen<br />
aus S. cerevisiae<br />
2.1.3 Weitere Proben<br />
2.1.3.1 Ubiquitin conjugating enzyme 6, Ubc6<br />
Die Synthese des Tail-Anchor-Proteins Ubc6 erfolgte mit dem Rapid Translation Sys-<br />
tem 100 der Firma Roche. Der Syntheseansatz (12 µl E. coli-Lysat, 10 µl Reaktions-<br />
lösung ∗ , 12 µl Aminosäurelösung ohne Methionin ∗ , 6,5 µl 1 mM Methioninlösung, 5 µl<br />
Rekonstitutionspuffer ∗ , 0,5 µl DNA (mmUbc6-cDNA von Th. Sommer (Berlin) in Vektor<br />
∗ Zusammensetzung von Roche nicht angegeben<br />
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