b a c - repOSitorium - Universität Osnabrück

2 Material und Methoden
Gabs = I
U
Grel = |dI|
U
I = Strom
U = Klemmspannung
Gabs = Absoluter Leitwert
Grel = Relativer Leitwert
Im Folgenden ist, soweit nicht gesondert erwähnt, mit Leitwert immer der relative Leit-
wert bezeichnet.
Der Leitwert eines Kanals ist abhängig von seinen strukturellen Eigenschaften wie dem
Durchmesser der Vestibüle und der Verengungszone (siehe 2.3.14) oder den geladenen
oder polaren Aminosäureresten in der Porenregion. Er variiert mit dem Offenzustand
des Kanals, aber im Fall von Translokasen eventuell auch mit der Struktur des in Ver-
engungszone oder Vestibül befindlichen Translokationssubstrates.
Die Datenaufnahme zur Auswertung des Leitwertes erfolgte unter symmetrischen Bedin-
gungen, um einen linearen Zusammenhang zwischen Strom und angelegter Klemmspan-
nung zu gewährleisten. Dafür wurden nach erfolgreicher Fusion eines Probenliposoms
(siehe 2.3.8) mit dem planaren Bilayer beide Messkammern perfundiert. Anschließend
wurden mit dem Programm Axoscope 9.0 (Axon Instruments) verschiedene Klemmspan-
nungen angelegt und die Stromdaten mit einer Samplingfrequenz von 5 kHz gespeichert.
Die Stromspuren wurden über einen Spannungsbereich von -60 mV bis +60 mV mit
einer Inkrementierung von 5 mV aufgenommen. Dabei wurden abwechselnd konstante
positive und negative Klemmspannungen ansteigend für einen Zeitraum von 60 Sekun-
den angelegt, getrennt von einer Pause von 30 Sekunden. Da der Sec61-Komplex bereits
bei Klemmspannungen ab ±55 mV ein gestörtes Schaltverhalten zeigte, erfolgte eine
Datenaufnahme bei höheren Membranpotenzialen nur in Ausnahmefällen.
Die Datenauswertung erfolgte mit dem Programm Ephys5 (Dr. Thomas Steinkamp,
Fachbereich Biologie, Universität Osnabrück). Dabei hat es sich als sinnvoll erwiesen zur
eindeutigen Identifizierung von Schaltereignissen ein Histogramm über die Stromdaten
zu erstellen, mit dessen Hilfe eine klare Trennung der unterschiedlichen Stromniveaus
auch bei niedrigen Klemmspannungen (kleinem dI) möglich war.
Aus den mit Ephys5 erhaltenen Stromdaten wurden mit dem Programm Excel 2003 die
jeweiligen Leitwerte errechnet. Diese Daten konnten anschließend mit dem Programm
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