b a c - repOSitorium - Universität Osnabrück

3 Ergebnisse
grenzt ist, oder ob Kaliumionen den Kanal in Anwesenheit von Ca 2+ ebenfalls schlech-
ter durchqueren können. Dazu wurden Spannungsrampen unter asymmetrischen KCl-
Bedingungen aufgenommen und CaCl2 in zunehmenden Konzentrationen symmetrisch
zugegeben. Bis zu einer Konzentration von 90 mM CaCl2 in den cis- und transseitigen
Messkammern kann keine nennenswerte Veränderung der Permeabilitätsverhältnisse für
K + - und Cl − -Ionen beobachtet werden (Abbildung 3.5 e). Die Permeabilität des Kanals
für Kaliumionen wird durch die Anwesenheit von Ca 2+ in der Porenregion auch bei
hohen Konzentrationen des bivalenten Ions nicht maßgeblich herabgesetzt.
3.1.6 Spannungsabhängige Offenwahrscheinlichkeit
Um die Offenwahrscheinlichkeit des Sec61-Komplexes zu untersuchen wurden Stromspu-
ren unter symmetrischen Pufferbedingungen aufgenommen. Klemmspannungen wurden
dabei für eine Minute angelegt. Aus den erhaltenen Daten werden die Offenwahrschein-
lichkeiten nach 2.3.15 ausgewertet und die arithmetischen Mittelwerte für mehrere Bi-
layer gegen die zugehörigen Klemmspannungen aufgetragen.
Alle untersuchten Proben des Sec61-Komplexes zeigen eine Abnahme der Offenwahr-
scheinlichkeit mit zunehmendem Membranpotenzial (Abbildung 3.6). Für den Kanal
aus RM-Proben liegt die maximale Offenwahrscheinlichkeit bei Spannungen um 0 mV
bei ca. 90 % (250 mM KCl, 10 mM Mops/Tris pH 7). Der Werteverlauf nimmt für steigen-
de positive und negative Haltepotenziale symmetrisch bis auf 40-55 % bei Spannungen
von -50 mV und +50 mV ab (Abbildung 3.6 a). Versuche mit dem aufgereinigten Sec61-
Komplex zeigen ein vergleichbares Ergebnis (Daten nicht gezeigt). In Experimenten mit
CaCl2-Elektrolyten (184 mM CaCl2, 10 mM Mops/Tris pH 7) ist für raue Mikroso-
men eine Verringerung der Offenwahrscheinlichkeit zu beobachten. Der Maximalwert
von 60 % nimmt symmetrisch bis auf 30-40 % ab (Abbildung 3.6 b). Des Weiteren ist
die Spannungsabhängigkeit der Offenwahrscheinlichkeit unter Verwendung von CaCl2-
Lösungen deutlich reduziert. In Experimenten mit dem aufgereinigten Sec61-Komplex
kann weder die Reduzierung der Offenwahrscheinlichkeit, noch die verminderte Span-
nungsabhängigkeit festgestellt werden (Abbildung 3.6 c).
Um zu untersuchen, ob die Verringerung der Offenwahrscheinlichkeit des Kanals aus RM-
Proben spezifisch auf Ca 2+ -Ionen zurückzuführen ist oder auch von anderen zweiwerti-
gen Kationen hervorgerufen wird, wurde das Experiment mit MgCl2-Elektrolytlösungen
wiederholt (176 mM MgCl2, 10 mM Mops/Tris pH 7). Die Datenauswertung zeigt keine
Reduzierung der Offenwahrscheinlichkeit im Vergleich zu den Experimenten mit KCl-
Puffer (Abbildung 3.6 d).
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