Untersuchungen zur bakteriellen Erkrankung Acidovorax ...

MATERIAL UND METHODEN
2.2.2 Klimaschränke und Klimakammern
Soweit nicht anders erwähnt, wurden alle Versuche in Klimaschränken
beziehungsweise Klimakammern durchgeführt, wobei die Temperatur- sowie
Lichteinstellung je nach Versuch variierten. Die Bewässerung erfolgte manuell bei
Bedarf. Verwendet wurden dabei eine geräumige, begehbare Klimakammer des Typs
VEKZ 05/440 der Firma Vötsch Industrietechnik GmbH, Balingen, Deutschland, ein
Pflanzenwachstumsschrank des Typs KBWF 720 der Firma Binder GmbH,
Tuttlingen, Deutschland und Klimaschränke der Firma Rubarth Apparate GmbH,
Laatzen, Deutschland. Des Weiteren wurde ein Kühlbrutschrank der Marke Friocell
von der Firma IUL Instruments GmbH, Königswinter, Deutschland verwendet.
2.3 Isolierung und Charakterisierung von Acidovorax
valerianellae-Bakterien
Bei Auftreten von Blattsymptomen, die durch das Bakterium A. valerianellae
verursacht sein könnten, wurde versucht, die Bakterien aus diesen Blattbereichen zu
isolieren. Dafür wurden die Symptom tragenden Blätter zunächst mit 70 %-igem
Alkohol und danach mit destilliertem Wasser abgespült und so von anhaftenden
Schmutzpartikeln und möglicherweise vorkommenden Epiphyten befreit und
oberflächendesinfiziert. Die Blätter wurden anschließend mit Zellstoff getrocknet
und dann in einem Mörser mit 1 ml 0,85 %-iger NaCl-Lösung homogenisiert. Das
Homogenat wurde 1:100 und 1:1000 verdünnt. Jeweils 20 µl des unverdünnten
Homogenats sowie der beiden Verdünnungen wurden auf eine KB-Agar-Schale mit
Cycloheximid in dreifacher Wiederholung aufgetragen und mittels Drigalskispatel
gleichmäßig verteilt. Nach ein- bis dreitägigem Wachstum bei 20 °C wurden
Verdünnungsausstriche mit Hilfe einer sterilen Impföse angefertigt, um reine
Bakterienkulturen auf KB-Agar-Schalen zu erzeugen. Dieser Schritt wurde bei
Bedarf mehrmals wiederholt. Anschließend wurden die Bakterienkolonien näher
charakterisiert (Fluoreszenz, Gramreaktions-Test, Mikrobiologie Bactident®
Oxidase-Test, Hypersensitivitätsreaktion, indirekter ELISA).
A. valerianellae besitzt einen typischen Geruch, der darüber hinaus die
Identifizierung unterstützte.
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