Untersuchungen zur bakteriellen Erkrankung Acidovorax ...

MATERIAL UND METHODEN
der Firma Unger, Landmaschinen, Heidelberg-Dossenheim, Deutschland hergestellt
und in Aussaatkisten abgelegt. Bis zur weiteren Verwendung wurden fertige Kisten
im Kühlhaus gelagert. Die Aussaat des Feldsalates erfolgte entweder von Hand um
eine definierte Kornablage zu gewährleisten (für die Versuche zur Sortenanfälligkeit)
beziehungsweise über ein Handsähgerät, mit dem bei jeder Betätigung drei bis fünf
Körner in den Topf abgelegt wurden. Um ein Austrocknen der Töpfe zu verhindern
und eine gleichmäßige Befeuchtung zu gewährleisten wurden die Töpfe abschließend
mit Sand abgestreut. Fertig ausgesäte Kisten wurden für die ersten fünf bis sechs
Tage zum Ankeimen bei konstanten Temperaturen von 15 °C gelagert. Nach dem
Ankeimen wurden die Feldsalatpflanzen im Gewächshaus weiterkultiviert. Eine
Bewässerung erfolgte, wenn nicht anders erwähnt, über Kopf nach Bedarf. Vor einer
weiteren Verwendung der Feldsalatpflanzen wurde jeder Erdpresstopf auf eine gut
entwickelte Pflanze vereinzelt.
2.8 Herstellung von A. valerianellae - Inokulum
Zur Herstellung einer A. valerianellae-Suspension wurden Bakterienzellen von zwei
bis drei Tage alten Kulturen von KB-Agar-Platten abgenommen und in eine
Natriumchloridlösung (0,85 %) suspendiert. Die optische Dichte wurde dabei anhand
des Standards für Gram-negative Bakterien des BIOLOG-Verfahrens (GN-NENT)
mittels Turbidimeter auf eine Bakterienkonzentration von ungefähr 3*10 8 cfu/ml
eingestellt. Da die Konzentrationseinstellung über diesen Weg nicht genauer
bestimmt werden konnte, war ein zusätzliches Ausplattieren der Bakteriensuspension
unerlässlich. Zunächst wurde die Konzentration auf einen Wert von in etwa
10 3 cfu/ml verdünnt und anschließend auf acht bis zehn KB-Agar-Platten zu je 20 µl
ausplattiert. Die Schalen wurden für drei bis vier Tage bei 20 °C beziehungsweise für
zwei bis drei Tage bei 25 °C inkubiert und abschließend fand ein Auszählen der
Kolonien statt und die Umrechnung auf Bakterienanzahl pro Milliliter in der
Ausgangssuspension.
Ausgehend von einer A. valerianellae-Konzentration von ungefähr 10 8 cfu/ml
(Einstellung über das Turbidimeter des BIOLOG-Verfahrens) wurden die
Konzentrationen 10 2 cfu/ml, 10 3 cfu/ml, 10 4 cfu/ml, 10 5 cfu/ml, 10 6 cfu/ml,
10 7 cfu/ml für die Verdünnungsreihe mit 0,85 %-iger NaCl-Lösung eingestellt. Die
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