Untersuchungen zur bakteriellen Erkrankung Acidovorax ...

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MATERIAL UND METHODEN Abbildung 2.2: Schwache Hypersensitivitätsreaktion an Tabak im Bereich der Infiltrationsstellen (innerhalb der Kreise) am Beispiel des A. valerianellae-Isolates 6.1.a (Infiltration mit einer Konzentration von 10 8 cfu/ml). 2.3.5 Indirekter ELISA (TAS Triple antibody sandwich) Der TAS-ELISA wurde 2009 von Frau K. Thiele, Institut für Epidemiologie und Pathogendiagnostik des Julius Kühn-Instituts, Quedlinburg, entwickelt und freundlicherweise für diese Arbeit <strong>zur</strong> Verfügung gestellt. Hierzu gehörte das polyklonale Immuglobulin G (IgG) 44 und der monoklonale Antikörper 7C10ESB10 aus dem Hybridomüberstand. Das Serum (IgG 44) und der monoklonale Antikörper wurden gegen das A. valerianellae-Isolat 16619 der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig entwickelt. Die zu beschichtenden Maxisorpplatten mit 96 Vertiefungen (442404, F96 Maxisorp, Nunc-Immuno-Plate, Lot. 111276) stammen von der Firma Thermo Fisher Scientific, Dänemark. Das verwendete Ziege-Anti-Maus-Anti-Körper (ZAMAK) - Konjugat wurde unter dem Namen Alkaline Phosphatase-conjugated AffiniPure Goat Anti- Mouse IgG + IgM (H+L) (Code: 115-055-044, Lot: 81251) von der Firma Jackson ImmunoResearch Europe Ltd, Suffolk CB8 1JX bezogen. Als Substrat diente 4-Nitrophenyl phosphate-disodium salt (p-NPP) (No. 00130/025, C 180506) der Firma LOEWE Biochemica GmbH, Deutschland. 12
MATERIAL UND METHODEN Die für den TAS-ELISA verwendeten Puffer wurden wie folgt selbst hergestellt: Coatingpuffer: 1,59 g Na2CO3 2,93 g NaHCO3 ad. 1000 ml H2O dest. pH-Wert 9,6 wurde eingestellt mit NaOH/HCl Waschpuffer (PBS): 8 g NaCl 0,2 g KH2PO4 1,46 g Na2HPO4 * 2 H2O 0,2 g KCl 0,5 ml Tween 20 ad. 1000 ml H2O dest. pH-Wert 7,4 wurde eingestellt mit NaOH/HCl Extraktionspuffer: 20 g Polyvinylpyrrolidinone 25 2 g Trockenmilch ad. 1000 ml Waschpuffer Der für den letzten Schritt verwendete Substratpuffer (Substrate Buffer 5 *, No. 07602/025) stammte von der Firma LOEWE Biochemica GmbH, Deutschland und wurde vor Verwendung 5-fach mit Aqua dest. verdünnt. Der TAS-ELISA wurde folgendermaßen durchgeführt: 1. Coating: Polyklonales Immunglobulin G (IgG) 44 wurde 1:100 in Coatingpuffer verdünnt und 100 µl wurden in je eine Vertiefung aufgetragen. Die folgende Inkubation wurde für zwei Stunden bei 37 °C durchgeführt. Vor dem nächsten Schritt wurden die Platten dreimal mit Waschpuffer (PBS) gewaschen. 13
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ERGEBNISSE 3.2 Untersuchungen zur S
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ERGEBNISSE 3.3.2.2 Alternative Wirt
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ERGEBNISSE Fortsetzung Tab. 3.10 In
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ERGEBNISSE auf KB-Agarschalen detek
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ERGEBNISSE Tabelle 3.12: Nachweis v
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ERGEBNISSE Pflanze Parzelle 1 1 2 3
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ERGEBNISSE 3.4 Saatgutuntersuchunge
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ERGEBNISSE 3.4.1.2 Ankeimmethode au
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ERGEBNISSE Fortsetzung Tab. 3.14 Au
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ERGEBNISSE 3.4.2 Dekontaminationsma
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ERGEBNISSE auf 0,032 (Tag vier) ab,
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ERGEBNISSE A B OD-Wert OD-Wert 1,5
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ERGEBNISSE Sie waren nach der Behan
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ERGEBNISSE Behandlung bei 66 °C f
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ERGEBNISSE OD-Wert B A OD-Wert 2 1,
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ERGEBNISSE So kam es zu einer zu ve
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DISKUSSION 4 DISKUSSION Mit den dur
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DISKUSSION Luftfeuchte, an Pflanzen
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DISKUSSION Temperaturspanne sinnvol
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DISKUSSION syringae pv. syringae, s
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DISKUSSION 4.2 Sortenanfälligkeit
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DISKUSSION positiv. Am Standort Sch
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DISKUSSION A. valerianellae blieb i
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DISKUSSION Xanthomonas campestris p
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DISKUSSION Aufschlüsse über die K
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DISKUSSION Saatgut erkennen. Sind a
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DISKUSSION eine Samenbehandlung mit
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DISKUSSION Behandlung zudem auf sei
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DISKUSSION dekontaminiert (Abb. 3.2
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DISKUSSION vollständig gehemmt wur
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ZUSAMMENFASSUNG befallen. Die Anzah
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SUMMARY No alternative hosts were d
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LITERATURVERZEICHNIS GRIMAULT, V.,
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LITERATURVERZEICHNIS PRIA, M. DALLA
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ANHANG 8 ANHANG 8.1 Publikationen T
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ANHANG 8.3 Versicherung Hiermit ver
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