Untersuchungen zur bakteriellen Erkrankung Acidovorax ...

MATERIAL UND METHODEN
Die für den TAS-ELISA verwendeten Puffer wurden wie folgt selbst hergestellt:
Coatingpuffer:
1,59 g Na2CO3
2,93 g NaHCO3
ad. 1000 ml H2O dest.
pH-Wert 9,6 wurde eingestellt mit NaOH/HCl
Waschpuffer (PBS):
8 g NaCl
0,2 g KH2PO4
1,46 g Na2HPO4 * 2 H2O
0,2 g KCl
0,5 ml Tween 20
ad. 1000 ml H2O dest.
pH-Wert 7,4 wurde eingestellt mit NaOH/HCl
Extraktionspuffer:
20 g Polyvinylpyrrolidinone 25
2 g Trockenmilch
ad. 1000 ml Waschpuffer
Der für den letzten Schritt verwendete Substratpuffer (Substrate Buffer 5 *,
No. 07602/025) stammte von der Firma LOEWE Biochemica GmbH, Deutschland
und wurde vor Verwendung 5-fach mit Aqua dest. verdünnt.
Der TAS-ELISA wurde folgendermaßen durchgeführt:
1. Coating:
Polyklonales Immunglobulin G (IgG) 44 wurde 1:100 in Coatingpuffer
verdünnt und 100 µl wurden in je eine Vertiefung aufgetragen. Die folgende
Inkubation wurde für zwei Stunden bei 37 °C durchgeführt. Vor dem
nächsten Schritt wurden die Platten dreimal mit Waschpuffer (PBS)
gewaschen.
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