(Rättsakter vilkas publicering är obligatorisk) KOMMISSIONENS ...
(Rättsakter vilkas publicering är obligatorisk) KOMMISSIONENS ...
(Rättsakter vilkas publicering är obligatorisk) KOMMISSIONENS ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
L 225/178 21.8.2001<br />
Europeiska gemenskapernas officiella tidning<br />
SV<br />
1.6.5 Vatten<br />
Som testvatten kan användas allt vatten som uppfyller de kemiska kraven för godtagbart spädvatten enligt tilllägg<br />
4 och i vilket testarternas kontrollgrupper har minst den överlevnadsgrad som anges i tilläggen 2 och 3.<br />
Testvattnet bör ha konstant kvalitet under hela testperioden. Vattnets pH-v<strong>är</strong>de får variera med högst ±<br />
0,5 pH-enheter. För att säkerställa att spädvattnet inte påverkar testresultaten på oönskat sätt (t.ex. genom<br />
komplexbildning med testämnet) eller har skadliga verkningar på yngelstammens prestanda, tas vattenprover<br />
regelbundet för analys. Mätningar av tungmetaller (t.ex. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd och Ni), viktiga anjoner och katjoner,<br />
t.ex. (Ca, Mg, Na, K, Cl och SO4), bekämpningsmedel (t.ex. total mängd organiska fosforföreningar eller<br />
total mängd organiska klorföreningar), totalt organiskt kol och uppslammade partiklar bör göras t.ex. var<br />
tredje månad i fall d<strong>är</strong> man vet att spädvattnet håller en relativt jämn kvalitet. Om vattenkvaliteten har visat<br />
sig vara jämn under minst ett år kan dessa kontroller göras med längre intervall (t.ex. var sjätte månad).<br />
1.6.6 Testlösningar<br />
Testlösningar med de valda koncentrationerna bereds genom utspädning av en stamlösning.<br />
Stamlösningen bör helst beredas genom enkel blandning eller omskakning av testämnet i spädvattnet på mekanisk<br />
väg (t.ex. omrörning och ultraljud). Mättnadskolonner (löslighetskolonner) kan användas för att få stamlösning<br />
av lämplig koncentration. Man bör så långt som möjligt undvika att använda lösnings- eller dispergeringsmedel<br />
(lösningsagenter). Sådana medel kan dock i vissa fall behövas för att få en stamlösning av lämplig<br />
koncentration. Lämpliga lösningsmedel <strong>är</strong> t.ex. aceton, etanol, metanol, dimetylformamid och trietylenglykol.<br />
Lämpliga dispergeringsmedel <strong>är</strong> t.ex. Cremophor RH40, Tween 80, metylcellulosa (0,01 %) och HCO-40. Om<br />
man använder agenter som <strong>är</strong> biologiskt lättnedbrytbara (t.ex. aceton) eller agenter med hög flyktighet bör<br />
man iaktta s<strong>är</strong>skild försiktighet eftersom sådana agenter kan orsaka problem med bakterieansamling vid<br />
genomflödestest. Om en lösningsagent används får den inte ha signifikant verkan på överlevnaden eller framkalla<br />
synliga skadliga verkningar på tidiga levnadsstadier (verkningar som framkommit vid test med rent lösningsmedel).<br />
Användningen av sådana ämnen bör undvikas med alla medel.<br />
Vid halvstatiskt test kan man välja mellan två olika förnyelseförfaranden. Det ena inneb<strong>är</strong> att nya testlösningar<br />
bereds i rena k<strong>är</strong>l och överlevande ägg och yngel överförs försiktigt till de nya k<strong>är</strong>len i en liten volym gammal<br />
lösning, samtidigt som man undviker exponering för luft. Det andra förfarandet inneb<strong>är</strong> att organismerna hålls<br />
kvar i k<strong>är</strong>len medan en andel (minst tre fj<strong>är</strong>dedelar) av testvattnet byts ut. Hur ofta mediet måste förnyas beror<br />
på testämnets stabilitet, men daglig förnyelse rekommenderas. Om resultaten från prelimin<strong>är</strong>a stabilitetstest (se<br />
avsnitt 1.4) visar att testämnet inte <strong>är</strong> stabilt (dvs. utanför området 80-120 % av nominell koncentration eller<br />
under 80 % av uppmätt startkoncentration) under ett helt förnyelseintervall, måste genomflödestest övervägas.<br />
Under alla omständigheter bör man undvika att stressa ynglen n<strong>är</strong> man förnyar vattnet.<br />
För genomflödestest behövs ett system som kontinuerligt portionerar och späder ut stamlösning av testämnet,<br />
så att man får en tillförsel av en serie koncentrationer till testk<strong>är</strong>len. Stamlösningens och spädvattnets flödeshastighet<br />
bör kontrolleras regelbundet, helst dagligen, och får inte variera med mer än 10 % under hela testet.<br />
En flödeshastighet som motsvarar minst fem testk<strong>är</strong>lsvolymer per 24 timmar har konstaterats vara lämplig (2).<br />
1.7 FÖRFARANDE<br />
I litteraturen finns information om kapaciteten hos toxicitetstest på fiskembryon och säckyngel. Ett antal<br />
exempel på litteratur finns i hänvisningarna (7), (8), (9).<br />
1.7.1 Exponeringsförhållanden<br />
1.7.1.1 Varaktighet<br />
Testet bör helst inledas inom 30 minuter efter befruktning av äggen. Embryona läggs i testlösningen före eller<br />
så snart som möjligt efter att blastocysten påbörjar klyvning, och under alla omständigheter innan gastrulastadiet<br />
inleds. Om äggen kommer från en kommersiell leverantör kan det hända att det inte <strong>är</strong> möjligt att<br />
starta testet strax efter befruktningen. Testets känslighet kan allvarligt påverkas av en försenad teststart. Testet<br />
måste inledas inom åtta timmar efter befruktningen. Eftersom ynglen inte utfodras under exponeringsperioden,<br />
bör testet avslutas strax innan någon av gulesäckarna i något av testk<strong>är</strong>len har absorberats helt eller innan yng-