(Rättsakter vilkas publicering är obligatorisk) KOMMISSIONENS ...

L 225/180 21.8.2001
Europeiska gemenskapernas officiella tidning
SV
Proverna kan behöva centrifugeras eller filtreras (t.ex. med porstorlek 0,45 lm). Eftersom det inte alltid är möjligt
att separera den icke-biotillgängliga fraktionen av testämnet från den biotillgängliga fraktionen genom centrifugering
eller filtrering bör emellertid dessa behandlingar undvikas.
Under testets förlopp mäts upplöst syrgas, pH och temperatur i alla testkärl. Totalhårdhet och salthalt (om
relevant) mäts i kontrollsatserna och i ett kärl med den högsta koncentrationen. Upplöst syrgas och salthalt
(om relevant) mäts minst tre gånger (vid testets början, mitt och slut). Vid halvstatiskt test rekommenderas att
upplöst syrgas mäts oftare, helst före och efter varje vattenförnyelse eller minst en gång i veckan. Vid halvstatiskt
test mäts pH i början och i slutet av varje vattenförnyelse och vid genomflödestest minst varje vecka.
Hårdheten mäts en gång per test. Temperaturen bör mätas dagligen och helst övervakas kontinuerligt i minst
ett testkärl.
1.7.5 Observationer
1.7.5.1 Stadiet för embryonal utveckling
Det embryonala stadium (dvs. gastrulastadium ) som råder när exponeringen för testämnet inleds bör bekräftas
så exakt som möjligt. Detta kan göras på ett representativt prov av ägg som har förvarats på lämpligt sätt.
Även litteratur kan konsulteras i fråga om beskrivning och illustration av de embryonala stadierna (2), (5), (10)
och (11).
1.7.5.2 Kläckning och överlevnad
Observationer av kläckning och överlevnad bör göras minst en gång per dag. Alla antal bör registreras. Det
kan vara önskvärt med tätare observationer i början av testperioden (t.ex. med 30 minuters intervall under de
tre första timmarna) eftersom överlevnadstiderna i vissa fall kan ha större relevans än blotta antalet dödsfall
(t.ex. när det förekommer akuta toxiska verkningar). Döda embryon och yngel bör avlägsnas så snart de observeras,
eftersom förruttnelse kan ske snabbt. Yttersta försiktighet bör iakttas när döda individer avlägsnas så att
man inte slår till eller orsakar fysiska skador på närliggande ägg eller yngel eftersom de är extremt sköra och
känsliga. Kriterierna för död varierar beroende på levnadsstadium:
— Ägg: särskilt i tidiga stadier en tydligt förlust av genomskinlighet och färgförändringar orsakade av koagulering
eller utfällning av protein, vilket leder till ett vitt ogenomskinligt utseende.
— Embryon: avsaknad av kroppsrörelse, avsaknad av hjärtslag eller ogenomskinlig missfärgning hos arter
vars embryon normalt är genomskinliga.
— Yngel: orörlighet, avsaknad av andningsrörelse, avsaknad av hjärtslag, vit ogenomskinlig färgning av centrala
nervsystemet eller avsaknad av reaktion på mekanisk stimulering.
1.7.5.3 Onormalt utseende
Gulesäckens absorptionsstadium och antalet yngel som har onormal kroppsform eller pigmentering bör registreras
med intervall vars längd bestäms enligt testperiodens längd och karaktären hos de abnormaliteter det gäller.
Man bör beakta att onormala embryon och yngel även förekommer av naturliga skäl, och kan för vissa
arter uppgå till flera procent i kontrollgruppen (kontrollgrupperna). Onormala djur bör inte avlägsnas från
testkärlet förrän de har dött.
1.7.5.4 Onormalt beteende
1.7.5.5 Längd
Abnormaliteter, t.ex. hyperventilation, okoordinerat simmande och atypisk passivitet bör registreras med intervall
vars längd bestäms enligt testperiodens längd. Sådana verkningar kan vara svåra att kvantifiera men kan,
när de observeras, vara till hjälp vid tolkningen av dödlighetsdata, dvs. ge upplysningar om ämnets toxiska
verkningssätt.
Vid testets slut rekommenderas mätning av individuella längder. Om det förekommer röta på stjärtfenan eller
frätning av fenorna bör standardlängder användas. I ett väl utfört test bör variationskoefficienten med avseende
på längden hos replikaten i kontrollgrupperna i regel vara Ä 20 %.