(Rättsakter vilkas publicering är obligatorisk) KOMMISSIONENS ...

21.8.2001 L 225/249
Europeiska gemenskapernas officiella tidning
SV
1.8 FÖRFARANDE
1.8.1 Exponeringsförhållanden
1.8.1.1 Testperiodens längd
1.8.1.2 Djurtäthet
Testperiodens längd är 21 dagar.
Föräldradjuren hålls individuellt, ett djur per testkärl, med 50-100 ml medium per kärl.
I vissa fall behövs större volymer med tanke på de krav som gäller för den analytiska procedur som används
för bestämning av testämnets koncentration, även om det för den kemiska analysen är tillåtet med pooling av
replikat. Om volymer över 100 ml används måste eventuellt den dos som ges till Daphnia ökas för att garantera
tillräcklig tillgång på foder och förenlighet med giltighetskriterierna. Vid genomflödestest kan alternativ
testutformning övervägas av tekniska skäl (t.ex. fyra grupper med 10 djur per grupp i en större volym), men
varje ändring av testutformningen måste rapporteras.
1.8.1.3 Antalet djur
1.8.1.4 Utfodring
1.8.1.5 Ljus
För halvstatiskt test behövs minst 10 djur per testkoncentration och minst 10 individuellt hållna djur i kontrollserierna.
För genomflödestest har en uppdelning med 40 djur i fyra grupper om 10 djur per testkoncentration visat sig
vara lämplig (1). Ett mindre antal testorganismer kan användas och man rekommenderar ett minimum på 20
djur per koncentration uppdelade i två eller flera replikat med samma antal djur (t.ex. fyra replikat med fem
Daphnia per replikat). I fråga om test där djuren hålls i grupper bör man dock beakta att reproduktionskapaciteten
inte kan uttryckas som totalantalet överlevande avkommor per föräldradjur om föräldradjur dör. I
sådana fall måste reproduktionskapaciteten uttryckas som ”totalantalet överlevande avkommor som har producerats
per föräldradjur som fanns närvarande vid testets början”.
Vid halvstatiskt test ges foder helst dagligen men minst tre gånger per vecka (vid byte av medium). Avvikelser
från detta (t.ex. vid genomflödestest) måste rapporteras.
Under testet bör föräldradjuren helst utfodras med levande algceller. En eller flera av följande arter kan användas:
Chlorella sp. Selenastrum capricornutum (numera Pseudokirchneriella subcapitata (11)) och Scenedesmus subspicatus.
Utfodringen bör grunda sig på mängden organiskt kol (C) som ges till varje föräldradjur. Forskningsresultat
(12) för Daphnia magna har visat att det är tillräckligt med dosnivåer mellan 0,1 och 0,2 mg organiskt kol
per Daphnia och dag för att nå upp till den mängd avkomma som behövs med tanke på giltighetskriterierna
för testet. Dosen kan ges med konstant dosering under hela testet eller, om så önskas, med lägre dosering i
början och därefter ökande dosering i takt med föräldradjurens tillväxt. I det senare fallet bör dosen ändå alltid
hållas inom det rekommenderade området 0,1–0,2 mg organiskt kol per Daphnia och dag.
Om andra mätningssätt (t.ex. antalet algceller eller ljusabsorbans) används för att kontrollera utfodringens dosnivå
(av bekvämlighetsskäl, eftersom mätning av kolhalten är tidskrävande) måste varje laboratorium upprätta
egna nomogram för mätningarna av algodlingens kolhalt (i tillägg 2 finns anvisningar för hur man upprättar
nomogram). Nomogrammen måste ses över minst årligen, och oftare om algodlingsbetingelserna har förändrats.
Ljusabsorbans har konstaterats vara en bättre metod än cellräkning när det gäller bestämning av kolhalten
(13).
Algsuspensionen som används för utfodring av Daphnia bör vara koncentrerad, så att minimal volym algodlingsmedium
överförs till testkärlen. För att höja algkoncentrationen kan man använda centrifugering med
påföljande återsuspension i destillerat vatten, avjoniserat vatten eller Daphnia-odlingsmedium.
Ljuset hålls på i 16 timmar med en intensitet som inte överskrider 15-20 lE ·m ¯2 ·s ¯1 .