华 南 农 业 大 学 农 学 院 第 三 届 综 述 大 赛 获 奖 作 品 论 文 集二 等 奖 作 品鉴 定 。 用 质 量 分 数 为 1.5% 的 氯 酸 碱 溶 液 , 选 取 带 1~2 片 绿 叶 且 生 长 比 较 一 致 的 幼 苗 浸 泡6~7d, 然 后 观 察 受 害 程 度 , 粳 稻 受 害 较 轻 , 籼 稻 则 较 重 。3 应 用 同 工 酶 标 记 对 栽 培 稻 籼 粳 分 化 的 研 究19 世 纪 60 年 代 以 来 , 应 用 同 功 酶 进 行 栽 培 稻 籼 粳 分 化 研 究 日 益 普 遍 , 同 工 酶 位 点具 有 更 好 的 籼 粳 分 化 判 别 效 果 , 同 工 酶 聚 丙 烯 酞 胺 凝 胶 电 泳 由 于 具 有 分 辨 率 高 等 优 点 ,也 越 来 越 受 到 当 时 各 研 究 者 的 喜 爱 。 国 际 上 多 用 淀 粉 凝 胶 研 究 多 种 酶 的 各 个 位 点 , 我 国学 者 多 用 聚 丙 烯 酰 胺 作 为 载 体 , 研 究 多 限 于 酯 酶 。Glaszmann( 1988 ) 采 用 同 工 酶 方 法 对 水 稻 进 行 分 类 分 化 研 究 。 孙 新 立 等 ( 1996 ) 采 用籼 粳 分 化 贡 献 较 大 的 5 种 同 工 酶 , 包 括 酯 酶 、 酸 性 磷 酸 酶 、 氨 肽 酶 、 苹 果 酸 酶 和 过 氧 化氢 酶 进 行 籼 粳 分 化 研 究 。 段 中 岗 和 梁 承 邺 ( 2005 ) 对 同 工 酶 的 提 取 、 电 泳 、 染 色 等 方 法 进行 改 进 , 建 立 了 一 套 实 用 经 济 的 水 稻 同 工 酶 聚 丙 烯 酞 胺 凝 胶 电 泳 分 析 方 法 测 定 籼 粳 分 化的 同 工 酶 带 , 分 析 了 水 稻 4 种 同 工 酶 , 发 现 Est-3,Est-4,Est-x 和 Pox-x 4 个 新 的 籼 梗 分化 位 点 , 其 中 Pox-x 为 一 新 位 点 , 该 位 点 在 籼 稻 中 有 1 条 带 , 在 粳 稻 中 为 亚 等 位 基 因 。汤 陵 华 等 ( 1989 ) 报 道 Amp-2,Acp-1,Cat-1 3 个 位 点 在 籼 粳 分 化 研 究 中 具 有 重 要 作 用 。 孙 新 立 等 ( 1996 ) 又 增 加 了Mal-1,Acp-2,Est-10 3 个 籼 粳 分 化 位 点 。Second 等 ( 1982 ) 发 现 了 40 个 同 工 酶 的 籼 粳 分化 位 点 差 异 。Second 等 ( 1982 ) 也 发 现 了 栽 培 稻 的 同 工 酶 多 态 性 , 试 验 品 种 可 清 楚 地 聚 类于 籼 、 粳 两 类 。 国 际 水 稻 所 的 GlasZIann( 1987 ) 对 同 工 酶 分 类 研 究 工 作 做 的 较 为 深 入 和 全面 。Cai 等 ( 2003 ) 利 用 酷 酶 Estlo 位 点 多 态 性 对 水 稻 籼 粳 分 化 作 了 研 究 。有 些 学 者 还 提 出 了 一 些 同 工 酶 的 量 化 函 数 来 进 行 籼 粳 分 化 研 究 。Sano( 1992 ) 采 用 六个 同 工 酶 位 点 ( Cat-l,AcP-l,pgl-I,Pgi-2,pox-2,Est-2) 的 Di( Di== Fi/(F i+Fj ) ) 平 均 值将 同 工 酶 量 化 来 别 籼 粳 ,xZ>xl 的 为 籼 稻 ,X2
华 南 农 业 大 学 农 学 院 第 三 届 综 述 大 赛 获 奖 作 品 论 文 集二 等 奖 作 品亚 种 杂 交 不 育 的 籼 粳 分 化 基 因 。 导 致 配 子 败 育 类 型 的 不 同 , 大 部 分 这 些 基 因 座 位 大 体 可归 为 2 大 类 : 一 类 是 籼 粳 型 等 位 基 因 互 作 导 致 雌 配 子 败 育 的 , 如 S5, S7, S8, S9,S15 和 S17 ( Ikehashi et al, 1988; Ikehashi et al,1996; Wan et al,1996; Wan et al, 1995; Wanet al,1998 ); 另 一 类 是 导 致 雄 配 子 败 育 的 , 如 Sa,Sb,Sc,Sd,Se 和 Sf 等 典 型 的 籼 型和 粳 型 等 位 基 因 的 分 化 ( 张 桂 权 等 ,1989; 张 桂 权 等 , 1993 ; 张 桂 权 等 ,1994 ), 有 些 基 因座 位 也 发 现 存 在 有 所 谓 的 广 亲 和 等 位 基 因 , 如 S5n( Ikehashi et al, 1988 )。4.1 利 用 RFLP 标 记 研 究 籼 粳 分 化80 年 代 中 期 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 ( RFLP ) 开 始 应 用 于 栽 培 稻 籼 粳 分 化 的 研 究 。 钱前 ( 1997 ) 采 用 8 种 限 制 性 内 切 酶 与 247 个 已 定 位 到 水 稻 12 条 染 色 体 上 的 分 子 探 针 结 合 ,对 典 型 籼 稻 南 京 11 和 典 型 粳 稻 金 南 凤 以 及 中 间 型 品 种 Bellemont之 间 存 在 的 零 等 位 位 点 进 行 了 分 析 。 结 果 表 明 , 零 等 位 标 记 在 F2 群 体 中 呈 显 性遗 传 , 可 特 异 鉴 别 籼 粳 差 异 。Sun 等 ( 1997 ) 用 RFLP 研 究 了 亚 洲 栽 培 稻 和 普 通 野 生 稻 的遗 传 多 样 性 发 现 野 生 稻 的 遗 传 多 样 性 大 于 栽 培 稻 、 籼 稻 稻 大 于 粳 稻 。 王 松 文 等 ( 2006 ) 选用 分 布 于 水 稻 12 条 染 色 体 上 的 RFLP 对 多 个 水 稻 品 种 进 行 分 析 , 结 合 生 物 信 息 学 方 法 分析 这 些 籼 粳 分 化 的 标 记 进 行 研 究 , 筛 选 到 28 个 RFLP 籼 粳 特 异 性 探 针 , 籼 粳 特 异 性 标 记的 生 物 信 息 学 分 析 表 明 , 这 些 标 记 在 基 因 组 水 平 上 存 在 差 异 。Zhang 等 ( 1992 ) 使 用 RFLP标 记 对 籼 粳 稻 多 态 性 和 籼 粳 分 化 进 行 了 分 析 ;Qian 等 ( 1995 ) 鉴 定 出 一 些 籼 粳 特 异 性 探 针 。Xu 等 ( 1994 ) 使 用 100 个 RFLP 探 针 对 236 个 水 稻 品 种 进 行 分 析 , 发 现 RZ329,RZ403,RG181 对 籼 粳 的 检 测 率 可 达 99%。Qian( 1995 ) 等 对 广 亲 和 品 种 的 鉴 定 中 也 发 现 了 RG64、RG351 这 两 个 特 异 性 探 针 。Cordesse 等 ( 1990 ) 对 亚 洲 栽 培 稻 52 个 品 种 的 18-26SrDNA 间 隔 区 ( IGS ) 进 行 了 RFLP分 析 , 共 发 现 了 7 个 长 度 级 别 的 间 隔 区 , 每 一 级 相 差 约 300bp, 但 最 后 的 一 级 相 差 约 600bp,多 数 品 种 都 具 有 一 个 以 上 的 长 度 级 别 , 进 一 步 证 实 了 间 隔 区 长 度 的 异 质 性 ( sano et al,1990 )。 就 籼 粳 稻 来 说 , 粳 稻 的 间 隔 区 往 往 较 短 , 先 稻 的 较 长 , 在 间 隔 区 长 度 方 面 发 生 了明 显 分 化 。 只 有 一 个 品 种 例 外 , 根 据 形 态 、 同 工 酶 将 该 品 种 确 定 为 籼 稻 , 但 它 却 表 现 出粳 稻 类 型 的 间 隔 区 长 度 , 他 们 推 测 可 能 发 生 了 少 量 粳 稻 向 籼 稻 的 基 因 渐 渗 。 庄 巧 云 等( 1997 ) 对 55 rRNA 基 因 间 隔 区 的 长 度 变 异 进 行 了 研 究 , 发 现 籼 、 粳 稻 均 具 有 独 特 的 PCR扩 增 带 型 , 因 此 认 为 间 隔 区 长 度 多 态 性 可 用 来 区 别 籼 粳 亚 种 。4.2 利 用 RAPD 标 记 研 究 籼 粳 分 化Machin( 1995 ) 发 现 RAPD 标 记 也 能 较 好 地 区 分 出 粳 型 水 稻 品 种 ,RAPD 标 记 在 栽 培稻 的 起 源 演 化 研 究 中 具 有 重 大 用 途 。 王 振 山 和 王 象 坤 等 ( 1996,1995 ) 对 栽 培 稻 和 野 生 稻的 RAPD 研 究 中 则 发 现 了 一 些 籼 粳 稻 特 异 带 和 野 生 稻 特 异 带, 而 且 中 国 野 生 稻 偏 粳 , 与 栽 培 籼 稻 的 差 异 比 较 大 。Yu 等 ( 1994 ) 用 42 个 引物 对 13 个 水 稻 和 陆 稻 品 种 进 行 了 RAPD 分 析 , 证 明 应 用 RAPD 方 法 可 以 有 效地 鉴 定 不 同 水 稻 品 种 间 的 遗 传 关 系 。 姜 树 坤 等 ( 2006 ) 应 用 RAPD 标 记 方 法 对 30 个 水 稻146
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