华 南 农 业 大 学 农 学 院 第 三 届 综 述 大 赛 获 奖 作 品 论 文 集二 等 奖 作 品Yan et al (2005) 利 用 2D-PAGE、 定 量 PCR 等 方 法 研 究 了 冷 害 对 水 稻 幼 苗 的 影 响 。将 水 稻 种 子 6℃ 处 理 6h 或 24h, 常 温 恢 复 24h 后 发 现 植 物 的 光 合 速 率 降 低 , 对 水 稻 叶 片进 行 分 离 和 鉴 定 ,2-DE 图 谱 上 可 重 复 检 测 出 1000 个 蛋 白 质 点 , 其 中 31 个 点 明 显 下 调 ,65 个 点 明 显 上 调 , 经 质 谱 鉴 定 这 些 蛋 白 可 能 参 与 信 号 转 导 、 光 合 作 用 、 能 量 代 谢 、 转 录等 , 进 一 步 分 析 表 明 , 转 录 水 平 和 蛋 白 质 的 最 终 表 达 联 系 并 不 紧 密 。将 培 养 2 周 的 水 稻 幼 苗 置 于 5℃ 环 境 条 件 下 48h, 用 蛋 白 组 学 方 法 对 叶 片 进 行 分 析 ,发 现 39 个 蛋 白 在 冷 处 理 后 发 生 明 显 变 化 ,19 个 上 调 ,20 个 下 调 。 在 排 除 了 二 磷 酸 核 酮糖 羧 化 酶 的 干 扰 后 , 与 防 御 有 关 的 蛋 白 质 就 可 以 清 晰 的 分 离 开 来 ,4 种 蛋 白 质 与 低 温 胁 迫有 密 切 联 系 。 从 鉴 定 的 结 果 来 看 , 与 能 量 代 谢 有 关 的 蛋 白 质 上 调 , 与 防 御 有 关 的 蛋 白 质下 调 (Hashimoto et al,2007)。2.1.4 高 温 胁 迫 下 水 稻 蛋 白 组 学 研 究高 温 会 导 致 水 稻 植 株 矮 小 , 降 低 水 稻 的 感 光 能 力 , 随 着 全 球 变 暖 的 加 剧 , 高 温 会 给水 稻 带 来 严 重 损 失 。Lin et al (2005) 研 究 了 水 稻 30-35℃ 下 颖 果 中 蛋 白 质 表 达 的 差 异 ,54个 差 异 蛋 白 被 鉴 定 出 来 , 其 中 21 种 蛋 白 参 与 碳 代 谢 ,14 种 蛋 白 调 节 物 质 合 成 与 分 解 ,9种 蛋 白 与 抗 性 相 关 。Lee et al (2007) 运 用 双 向 电 泳 和 质 谱 技 术 研 究 了 42℃ 的 环 境 条 件 下 下 水 稻 叶 片 的蛋 白 表 达 模 式 , 可 重 复 检 测 出 1000 个 蛋 白 质 点 ,73 个 点 表 达 差 异 ,48 个 点 被 鉴 定 出 来 ,这 些 蛋 白 质 参 与 能 量 代 谢 、 氧 化 还 原 反 应 等 生 命 过 程 , 还 发 现 一 些 低 分 子 量 的 热 应 急 蛋白 , 可 能 与 高 温 诱 导 有 关 , 用 蛋 白 质 免 疫 印 迹 法 进 一 步 分 析 发 现 , 从 基 因 转 录 到 翻 译 成蛋 白 质 并 不 是 一 致 的 , 可 能 会 受 到 环 境 的 影 响 。不 同 的 高 温 条 件 下 , 蛋 白 质 的 表 达 也 存 在 差 异 。Han et al (2009) 分 别 研 究 了 35℃、40℃ 和 45℃ 条 件 下 水 稻 种 子 中 的 蛋 白 组 , 结 果 发 现 高 温 胁 迫 下 参 与 木 质 部 构 成 的 蛋 白 质明 显 上 调 , 而 且 温 度 越 高 , 就 会 诱 导 更 多 的 热 应 急 蛋 白 , 这 些 蛋 白 质 主 要 参 与 光 合 作 用和 抗 氧 化 作 用 。2.1.5 重 金 属 胁 迫 下 水 稻 蛋 白 组 学 研 究重 金 属 对 植 物 有 毒 害 作 用 , 不 仅 影 响 水 稻 的 产 量 , 还 危 害 着 人 类 健 康 。Yang et al (2007) 对 铝 离 子 胁 迫 下 水 稻 根 部 进 行 蛋 白 组 学 研 究 , 识 别 铝 防 御 蛋 白 , 结果 17 种 蛋 白 质 被 鉴 定 出 来 , 其 中 12 个 蛋 白 质 白 表 达 上 调 ,5 个 蛋 白 质 表 达 受 到 抑 制 。 进一 步 研 究 发 现 半 胱 氨 酸 合 酶 可 能 是 参 与 水 稻 铝 毒 适 应 的 核 心 物 质 , 作 为 硫 代 谢 的 前 导 物和 调 节 物 , 减 少 硫 化 物 转 化 成 谷 胱 甘 肽 。Cd 和 TCB 胁 迫 对 水 稻 幼 苗 蛋 白 质 组 有 明 显 的 影 响 , 在 许 多 蛋 白 质 的 表 达 受 到 抑 制的 同 时 , 也 有 一 定 数 量 的 蛋 白 质 的 表 达 受 到 明 显 的 诱 导 。 对 这 些 被 诱 导 的 蛋 白 的 类 型 和功 能 分 析 表 明 , 主 要 是 一 些 解 毒 、 细 胞 壁 物 质 代 谢 、 激 素 代 谢 、 次 生 代 谢 相 关 的 酶 ( 方定 珍 ,2008)。As 胁 迫 导 致 水 稻 根 系 中 砷 含 量 增 加 , 发 生 脂 质 过 氧 化 反 应 。 双 向 电 泳 后 经 质 谱 分 析61
华 南 农 业 大 学 农 学 院 第 三 届 综 述 大 赛 获 奖 作 品 论 文 集二 等 奖 作 品有 23 个 砷 调 控 蛋 白 被 鉴 定 出 来 , 谷 胱 甘 肽 为 砷 胁 迫 上 调 蛋 白 , 还 受 H2O2 的 调 节 , 可 能在 缓 解 砷 胁 迫 时 起 到 主 要 的 调 节 作 用 (Ahsan et al,2008)。2.1.6 其 它 非 生 物 胁 迫 下 水 稻 蛋 白 组 学 研 究水 稻 叶 鞘 伤 害 对 蛋 白 质 也 有 影 响 ,Shen et al(2003) 应 用 蛋 白 质 组 学 方 法 首 次 揭 示了 水 稻 叶 鞘 伤 害 信 号 应 答 过 程 中 蛋 白 质 的 变 化 , 发 现 伤 害 后 至 少 有 10 个 蛋 白 被 诱 导 或 表达 量 上 调 ,19 个 蛋 白 被 抑 制 或 表 达 量 下 调 。Agrawal et al(2002) 用 2D-PAGE、 氨 基 酸 测 序 、 免 疫 杂 交 方 法 , 首 次 检 测 了 臭 氧 对水 稻 幼 苗 蛋 白 的 影 响 。紫 外 线 (UV)-B 辐 射 增 强 导 致 植 物 形 态 和 遗 传 物 质 结 构 变 异 、 光 合 色 素 破 坏 、 光 合作 用 强 度 降 低 , 从 而 间 接 影 响 人 类 生 活 。 陈 锦 阳 等 (2008) 利 用 差 异 蛋 白 组 分 析 方 法 对 两个 不 同 的 抗 性 品 种 进 行 分 析 , 以 探 讨 水 稻 抗 UV-B 辐 射 的 分 子 机 制 。 结 果 发 现 有 39 个 蛋白 质 产 生 差 异 , 共 鉴 定 出 23 个 差 异 蛋 白 点 , 这 些 蛋 白 质 从 不 同 角 度 反 映 了 UV-B 辐 射 对水 稻 的 影 响 。磷 是 作 物 三 大 必 须 营 养 元 素 之 一 , 土 壤 中 磷 元 素 不 足 影 响 植 物 的 生 长 。 郭 玉 春 等(2010) 以 磷 高 效 水 稻 品 种 IR71331 为 材 料 , 分 析 低 磷 胁 迫 下 水 稻 根 系 蛋 白 的 表 达 差 异 ,结 果 表 明 低 磷 胁 迫 下 共 有 29 个 蛋 白 , 其 中 3d 时 间 点 有 17 个 蛋 白 上 调 、11 个 下 调 、1 个新 增 ,6d 时 间 点 有 8 个 上 调 、19 个 下 调 、1 个 抑 制 表 达 , 其 中 的 10 个 差 异 表 达 蛋 白 可 归为 信 号 转 导 相 关 蛋 白 、 基 因 表 达 相 关 蛋 白 、 代 谢 相 关 蛋 白 和 离 子 转 运 相 关 蛋 白 4 个 功 能类 群 ,Serpin、SAM 和 MYB 类 转 录 因 子 是 水 稻 响 应 低 磷 胁 迫 的 关 键 蛋 白 。2.2 在 生 物 逆 境 胁 迫 中 的 应 用水 稻 在 与 害 虫 、 病 原 微 生 物 长 期 相 互 斗 争 的 过 程 中 , 逐 渐 形 成 了 一 系 列 复 杂 的 防 御反 应 机 制 。 水 稻 是 怎 样 识 别 敌 害 , 然 后 通 过 信 号 传 导 网 络 引 发 复 杂 的 防 御 反 应 , 基 因 表达 的 响 应 变 化 , 继 而 引 发 蛋 白 质 和 各 种 代 谢 水 平 的 改 变 , 导 致 水 稻 生 长 发 育 的 延 迟 , 这些 都 是 我 们 要 探 讨 的 问 题 。 目 前 对 生 物 胁 迫 下 水 稻 蛋 白 组 学 研 究 主 要 集 中 在 病 害 方 面 。Chen et al (2002) 对 超 强 抗 虫 植 株 和 极 端 感 虫 植 株 进 行 蛋 白 组 分 析 , 研 究 发 现 虫 害48h 后 , 感 虫 株 系 秧 苗 的 蛋 白 质 P40 的 表 达 明 显 减 弱 甚 至 消 失 , 而 在 抗 虫 株 系 中 ,P40 的表 达 未 受 影 响 , 所 以 P40 可 能 与 水 稻 受 褐 飞 虱 危 害 后 引 起 的 应 答 有 关 。Lee et al (2006) 对 抗 病 和 感 病 的 两 个 水 稻 品 种 进 行 蛋 白 组 学 研 究 发 现 , 接 种 了 纹 枯病 后 7 种 蛋 白 质 的 表 达 量 增 加 , 其 中 6 种 蛋 白 与 防 御 、 光 合 作 用 有 关 , 并 且 首 次 发 现 抗 性品 种 接 菌 后 会 诱 导 3ß 巯 基 类 固 醇 脱 氢 酶 产 生 , 这 种 酶 可 能 与 防 御 纹 枯 病 相 关 。 还 有 一 些研 究 者 利 用 蛋 白 质 组 学 研 究 植 物 逆 境 信 号 的 诱 发 、 感 受 、 传 导 机 制 上 。Mahmood et al (2006)也 用 抗 病 与 感 病 品 种 对 白 叶 枯 病 进 行 研 究 , 提 取 叶 片 中 蛋 白 质 进 行 蛋 白 组 学 分 析 发 现 ,20 种 蛋 白 质 表 达 差 异 , 这 些 蛋 白 质 与 防 御 (20%)、 代 谢 (20%)、 能 量 (30%) 有 关 , 同时 表 达 上 调 的 两 种 蛋 白 也 受 茉 莉 酸 的 调 节 , 表 明 水 稻 抵 抗 白 叶 枯 病 的 防 御 途 径 是 通 过 茉莉 酸 调 节 的 。Rakwal et al (2000) 结 合 免 疫 学 方 法 研 究 了 外 源 茉 莉 酸 在 水 稻 防 御 机 制 上 作62
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