华 南 农 业 大 学 农 学 院 第 三 届 综 述 大 赛 获 奖 作 品 论 文 集二 等 奖 作 品前 分 子 标 记 技 术 在 烟 草 品 种 亲 缘 关 系 鉴 定 、 核 心 种 质 资 源 指 纹 图 谱 的 构 建 等 工 作 中 已 经得 到 广 泛 应 用 。 但 是 对 烟 草 种 质 资 源 深 度 研 究 不 够 , 创 造 利 用 较 少 , 烟 草 育 种 面 临 亲 本[30]匮 乏 , 品 种 遗 传 背 景 狭 窄 , 盲 目 性 、 重 复 性 大 等 问 题 。2.2 分 子 图 谱 构 建在 DNA 分 子 标 记 技 术 出 现 以 前 , 各 种 生 物 的 遗 传 图 谱 都 是 利 用 形 态 、 生 化 等 常 规 标记 来 构 建 的 , 这 些 遗 传 标 记 的 数 量 在 构 建 作 图 群 体 的 一 对 亲 本 间 极 为 有 限 , 因 此 , 经 典[31]遗 传 图 谱 的 发 展 较 为 缓 慢 。 自 从 Bostein 等 (1980) 首 次 用 RFLP 作 为 遗 传 标 记 构 建 了人 类 的 第 一 张 基 因 连 锁 图 谱 之 后 ,DNA 分 子 标 记 技 术 就 开 始 广 泛 地 应 用 于 其 它 动 、 植 物遗 传 图 谱 的 构 建 中 。 目 前 水 稻 、 小 麦 、 玉 米 、 番 茄 等 作 物 已 经 拥 有 了 高 密 度 甚 至 饱 和 的[32-35遗 传 连 锁 图 谱 ]。 近 年 来 , 随 着 分 子 标 记 技 术 的 发 展 、 成 熟 , 众 多 学 者 利 用 分 子 标 记对 烟 草 的 遗 传 连 锁 图 谱 进 行 了 绘 制 。 目 前 的 研 究 表 明 , 栽 培 种 烟 草 有 48 条 染 色 体 , 全 长[36]约 4600MB, 约 为 人 类 基 因 组 全 长 的 1.5 倍 。[37]2001 年 Lin 等 以 来 自 烟 草 野 生 种 间 杂 交 产 生 的 F2 作 为 作 图 群 体 , 构 建 了 包 括 69 个RFLP 标 记 和 102 个 PARD 标 记 在 内 的 、 由 19 个 连 锁 群 组 成 第 一 张 烟 草 分 子 标 记 遗 传 连 锁[38]图 。 日 本 的 Nishi 等 (2003) 利 用 从 125 个 DH 群 体 中 筛 选 的 117 个 AFLP 标 记 , 绘 制 了 包[39]含 10 个 连 锁 群 的 连 锁 图 谱 。 肖 柄 光 等 (2006) 以 烤 烟 品 种 杂 交 得 到 的 137 个 DH 系 为 作图 群 体 , 构 建 了 由 10 个 ISSR 标 记 和 147 个 RAPD 标 记 组 成 、 包 括 27 个 连 锁 群 的 烤 烟 分 子 标记 遗 传 连 锁 图 , 该 图 谱 平 均 图 距 1411cM, 覆 盖 长 度 183812cM, 是 国 内 外 构 建 的 第 一 张 烤[40]烟 分 子 标 记 遗 传 连 锁 图 。Bindler 等 (2007) 利 用 Hicks Broad Leaf 和 Red Russian 杂 交 产生 的 186 个 F2 单 株 作 为 作 图 群 体 , 构 建 了 第 一 张 烟 草 SSR 标 记 遗 传 连 锁 图 , 该 连 锁 图 包[41]含 了 24 个 连 锁 群 , 共 有 286 个 SSR 标 记 和 293 个 SSR 位 点 , 全 长 1930cM。 马 红 勃 等 (2009)采 用 烤 烟 品 种 台 烟 7 号 与 白 肋 烟 品 种 白 肋 21 杂 交 产 生 的 187 个 F2 单 株 作 为 作 图 群 体 , 利 用筛 选 的 68 个 SRAP 和 ISSR 引 物 , 构 建 了 一 张 包 含 26 个 连 锁 群 、92 个 SRAP 和 20 个 ISSR 标 记[42]位 点 的 烟 草 遗 传 连 锁 图 谱 。 该 图 谱 覆 盖 长 度 为 1560.2 cM, 平 均 图 距 18.1cM。 蔡 长 春 等(2009) 利 用 112 个 AFLP、6 个 SRAP 标 记 构 建 了 白 肋 烟 的 分 子 标 记 遗 传 连 锁 图 谱 , 包 括[43]22 个 连 锁 群 (A1~A22), 总 遗 传 长 度 为 1 953.6 cM, 标 记 的 平 均 间 距 为 20.5 cM。Bindler 等(2011) 利 用 烟 草 品 种 Hicks Broadleaf 与 Red Russian 的 杂 交 F2 作 为 作 图 群 体 , 构 建 了 包括 2317 个 SSR 标 记 ,2363 个 位 点 在 内 的 24 个 连 锁 群 , 总 遗 传 长 度 为 3267 cM, 标 记 间 的 平均 距 离 为 1.5 cM。 这 是 目 前 世 界 上 包 含 标 记 位 点 最 广 、 标 记 密 度 最 大 、 平 均 图 距 最 小 的烟 草 分 子 连 锁 图 谱 。 总 体 上 , 烟 草 分 子 标 记 遗 传 图 谱 构 建 程 度 远 远 落 后 于 其 他 作 物 , 这可 能 是 由 于 烟 草 材 料 本 身 属 于 异 源 四 倍 体 ,48 条 染 色 体 基 因 组 大 和 分 子 标 记 技 术 大 多 在烟 草 中 开 发 利 用 较 少 造 成 的 。2.3 基 因 定 位 及 分 子 标 记 辅 助 选 择分 子 标 记 辅 助 选 择 (Molecular Marker-Assisted Selection,MAS) 是 分 子 标 记 在 育 种上 的 一 个 重 要 应 用 , 利 用 与 目 标 性 状 相 连 锁 的 分 子 标 记 可 以 对 育 种 材 料 从 DNA 水 平 上 进95
华 南 农 业 大 学 农 学 院 第 三 届 综 述 大 赛 获 奖 作 品 论 文 集二 等 奖 作 品行 高 效 选 择 , 从 而 对 作 物 产 量 、 品 质 和 抗 性 等 性 状 进 行 改 良 。[44]分 子 标 记 辅 助 选 择 近 年 来 在 烟 草 上 得 到 了 越 来 越 多 的 应 用 。 郭 生 云 等 (2001) 利 用[45]RAPD 标 记 找 到 了 一 个 和 烤 烟 抗 赤 星 病 密 切 相 关 的 DNA 片 段 。 王 扬 等 (2001) 用 113 个RAPD 引 物 对 12 个 烟 草 品 种 进 行 反 复 实 验 找 到 了 一 个 极 有 可 能 与 烟 草 的 抗 、 感 病 基 因 相[46]连 锁 的 标 记 。 张 汉 尧 (2001) 通 过 RAPD 分 析 , 筛 选 出 了 一 个 与 烤 烟 抗 赤 星 病 基 因 连[47]锁 的 标 记 和 一 个 与 黑 胫 病 抗 性 基 因 连 锁 的 标 记 。Johnson 等 (2002) 利 用 Coker 371-Gold与 K326 杂 交 产 生 的 BC1F1 加 倍 单 倍 体 , 采 取 混 合 分 离 法 (BAS), 初 步 筛 选 到 60 个 黑 胫[48]病 抗 性 (Ph) 相 关 RAPD 标 记 。Lewis 等 (2005) 利 用 已 克 隆 的 来 源 于 N. glutinosa 的 TMV抗 性 基 因 序 列 设 计 引 物 , 对 12 个 TMV 抗 性 种 质 进 行 了 AFLP 扩 增 , 发 现 5 份 种 质 的 TMV[49]抗 性 基 因 位 于 H 染 色 体 上 , 其 余 7 份 则 位 于 其 它 染 色 体 上 。 范 静 苑 等 (2009) 利 用 135对 SSR 引 物 对 烟 草 抗 黄 瓜 花 叶 病 病 毒 (CMV) 进 行 分 子 标 记 和 分 析 , 研 究 了 烟 草 CMV抗 性 鉴 定 与 抗 病 基 因 相 连 锁 的 标 记 的 筛 选 方 法 , 探 讨 了 烟 草 CMV 的 抗 性 遗 传 规 律 。 它[50]们 与 抗 性 基 因 的 遗 传 距 离 分 别 为 6.51cM 和 14.13cM。 陈 万 胜 (2008) 通 过 BSA 方 法 ,从 1100 个 SRAP 引 物 组 合 筛 选 到 两 个 在 马 铃 薯 Y 病 毒 病 抗 病 池 和 感 病 池 之 间 表 现 多 态 性的 引 物 组 合 , 扩 增 出 两 条 多 态 性 的 谱 带 , 片 段 长 度 分 别 为 610bp 和 450bp。 徐 秀 红 [51](2005)以 含 有 来 自 N.longiflora 的 野 火 病 抗 性 基 因 的 Ky14 为 抗 病 亲 本 与 感 野 火 病 的 品 种 G-140杂 交 , 对 其 杂 交 F2 进 行 RAPD 分 析 , 从 423 个 随 机 引 物 中 筛 选 到 一 个 与 野 火 病 抗 性 基 因[52]紧 密 连 锁 的 RAPD 标 记 。 杨 友 才 等 (2006) 选 用 高 感 青 枯 病 品 种 " 红 花 大 金 元 " 与 高抗 青 枯 病 品 种 "Ti448A" 配 制 亲 本 及 其 杂 交 后 代 F1、F2、BC1P1。 依 据 混 合 群 体 分 组 分析 法 (BSA) 建 立 抗 青 枯 病 基 因 池 和 感 青 枯 病 基 因 池 , 通 过 RAPD 试 验 , 从 近 200 个 随 机引 物 中 筛 选 出 一 个 在 两 池 间 具 有 多 态 性 的 引 物 S503, 用 双 亲 、F1、F2 单 株 DNA 进 行 RAPD试 验 证 明 了 该 引 物 扩 增 出 的 特 异 性 片 段 S503-750 是 一 个 与 抗 青 枯 病 基 因 连 锁 的 RAPD 标[53]记 , 此 标 记 与 抗 青 枯 病 基 因 间 的 重 组 率 为 5.984%, 连 锁 距 离 为 6.261 cM。 高 加 明 (2010)利 用 香 料 烟 抗 青 枯 病 品 种 kokubu 和 Xanthi, 感 病 品 种 胶 南 香 料 烟 和 Samsun 配 制 杂 交 组[54]合 , 应 用 分 离 群 体 分 析 法 筛 选 得 到 与 香 料 烟 青 枯 病 抗 病 基 因 连 锁 的 SSR 标 记 。 吴 海 乔(2010) 以 烟 草 青 枯 病 抗 病 品 种 岩 烟 97 作 母 本 , 感 病 品 种 红 花 大 金 元 作 父 本 , 构 建 了 一个 F2 群 体 , 利 用 已 发 表 和 新 开 发 的 1152 对 引 物 对 双 亲 进 行 SSR 分 析 , 共 筛 选 出 4 个 在抗 、 感 池 间 表 现 差 异 的 标 记 (M45、M69、Tp1244 和 Tp1253), 其 中 M45 和 M69 先 前已 被 定 位 在 同 一 连 锁 群 上 , 遗 传 距 离 很 近 。Tp1244 和 Tp1253 为 新 开 发 标 记 , 位 置 未 知 。[55]该 研 究 结 果 显 示 , 至 少 存 在 1 个 青 枯 病 抗 性 基 因 。 杜 传 印 (2006) 用 AFLP 标 记 对 白肋 烟 品 种 L8 和 正 常 绿 色 型 烤 烟 品 种 大 白 筋 599 构 建 了 一 个 回 交 分 离 群 体 进 行 白 肋 型 烟 草[56]叶 色 性 状 基 因 分 析 , 找 到 一 个 与 控 制 白 肋 型 叶 色 性 状 基 因 相 连 锁 的 AFLP 标 记 。 任 民(2008) 以 香 气 性 状 存 在 明 显 差 异 的 烤 烟 特 殊 香 型 品 种 大 白 筋 599 和 普 通 香 型 品 种K326 为 亲 本 , 构 建 了 F2、BC1 和 DH 遗 传 群 体 , 应 用 SSR 和 TRAP 标 记 对 其 高 香 气 特[57]征 性 状 进 行 了 遗 传 定 位 研 究 , 筛 选 到 一 个 距 离 该 性 状 8.37cM 的 SSR 标 记 。 肖 炳 光 等96
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