The effects of activated carbon and plants diversity ... - 华南农业大学

华 南 农 业 大 学 农 学 院 第 三 届 综 述 大 赛 获 奖 作 品 论 文 集一 等 奖 作 品用 于 禾 本 科 诱 导 的 基 本 培 养 基 最 常 用 的 是 MS 培 养 基 、N6 培 养 基 、B5 培 养 基 。 也 有部 分 是 改 良 的 培 养 基 , 如 : 象 草 的 幼 穗 在 的 幼 穗 脱 分 化 培 养 基 就 采 用 MS 无 机 盐 和 B5 有[28]机 成 分 配 成 混 合 培 养 基 , 狗 牙 根 (C. dactylon) 的 匍 匐 茎 诱 导 愈 伤 组 织 采 用 的 则 是 N6 大[37]量 元 素 、B5 微 量 元 素 和 MS 铁 盐 配 成 的 混 合 培 养 基 。 大 多 数 培 养 基 中 都 加 有 蔗 糖 , 蔗糖 在 植 物 的 组 织 培 养 中 的 一 般 功 能 是 作 为 碳 源 和 调 节 培 养 基 的 渗 透 压 。 有 研 究 中 发 现 蔗糖 在 黑 麦 草 (L. perenne) 的 分 化 中 起 着 重 要 的 调 节 作 用 , 低 于 3% 的 蔗 糖 不 利 于 黑 麦 草 的[45]分 化 , 但 其 机 理 还 不 清 楚 , 这 有 待 于 进 一 步 的 研 究 , 培 养 基 以 pH5.6~6 为 宜 。 凝 固 剂 的[44,52]使 用 以 琼 脂 为 主 , 一 般 0.6%~0.8%, 也 有 研 究 采 用 植 物 凝 胶 作 为 培 养 基 的 凝 固 剂 。[36] [39,44]除 此 之 外 , 椰 汁 、 水 解 络 蛋 白 、 维 生 素 B1 [39] [44] [39]、 植 物 防 腐 剂 混 合 物 、 抗 坏 血 酸 、[44, 54]脯 氨 酸 、 等 , 常 作 为 额 外 添 加 剂 , 在 很 多 牧 草 的 组 织 培 养 中 采 用 , 其 添 加 量 视 具 体情 况 而 定 。影 响 愈 伤 组 织 诱 导 效 果 的 因 素 除 了 外 植 体 类 型 、 培 养 基 类 型 、 添 加 物 成 分 、 激 素 配比 和 环 境 因 素 外 , 相 同 品 种 的 不 同 基 因 型 材 料 在 进 行 愈 伤 组 织 诱 导 时 , 往 往 也 表 现 出 很大 差 异 。 御 谷 (P. glaucum) 的 愈 伤 组 织 诱 导 就 表 现 出 较 大 的 基 因 型 依 赖 , 不 同 基 因 型诱 导 愈 伤 组 织 的 效 果 不 同 , 其 差 异 不 仅 表 现 在 诱 导 频 率 上 , 还 表 现 出 愈 伤 组 织 的 形 态 差[56]异 。如 今 , 很 多 研 究 都 集 中 在 如 何 提 高 愈 伤 组 织 的 诱 导 频 率 的 问 题 的 上 。 有 实 验 以 无 芒雀 麦 (Bromus inermis) 成 熟 种 子 为 材 料 , 经 能 量 为 30 keV, 剂 量 为 3.0×10 17 N + /cm 2 的 氮 离子 注 入 处 理 后 接 种 到 MS+2,4-D 4 mg·L -1 +KT 0.01 mg·L -1 的 培 养 基 中 进 行 愈 伤 组 织 诱 导 ,[57]结 果 表 明 : 经 离 子 注 入 后 的 种 子 的 愈 伤 组 织 诱 导 率 高 于 未 经 离 子 注 入 处 理 的 种 子 。总 之 , 牧 草 愈 伤 组 织 作 为 牧 草 转 基 因 技 术 的 受 体 , 其 诱 导 频 率 和 质 量 直 接 影 响 了 后期 遗 传 转 化 的 效 果 。 一 般 认 为 , 诱 导 出 较 高 频 率 的 胚 性 愈 伤 组 织 是 实 现 高 效 基 因 转 化 的[58,59]必 要 条 件 。2.4 愈 伤 组 织 再 分 化获 得 的 愈 伤 组 织 已 经 完 成 了 细 胞 的 脱 分 化 过 程 , 需 要 转 到 再 分 化 培 养 集 中 进 行 再 分化 培 养 。 禾 本 科 牧 草 愈 伤 组 织 再 分 化 较 为 容 易 , 胚 性 愈 伤 组 织 在 适 宜 的 再 分 化 培 养 基 中[60]经 过 一 段 时 间 的 培 养 能 够 快 速 分 化 成 苗 。 一 般 认 为 在 植 物 的 愈 伤 组 织 再 分 化 时 , 需 要添 加 较 高 浓 度 的 细 胞 分 裂 素 。 如 皇 竹 草 (P. purpureum × P. typhoideum) 愈 伤 组 织 在 MS+ 6-BA 6 mg·L -1 + KT 1 mg·L -1 + NAA 0.5 mg·L -1 [39]中 经 行 再 分 化 培 养 , 狼 尾 草(P.alopecuroides) 在 MS + 2,4-D 2 mg·L -1 + 6-BA 3 mg·L -1 的 培 养 基 中 使 愈 伤 组 织 再 分 化成 苗 , 分 化 频 率 60~90% [43] , 杂 交 狗 牙 根 (C. dactylon × C. transvaalensis) 愈 伤 组 织 用N6 大 量 元 素 + B5 微 量 元 素 + MS 铁 盐 + 6-BA 2.5 mg·L -1 进 行 不 定 芽 再 分 化 , 分 化 率 高 达95% [43] 。 只 要 获 得 的 愈 伤 组 织 质 量 好 , 都 能 获 得 较 高 的 绿 苗 分 化 率 , 这 个 观 点 在 很 多 牧草 组 织 培 养 研 究 过 程 中 得 到 证 实 。 如 柳 枝 稷 (P. virgatum ) [47] 、 杂 交 狼 尾 草 (P. americanum× P.purpureum) [51] 等 的 愈 伤 组 织 再 分 化 都 证 明 了 这 一 点 。19