01990R2676-20050813 - EUR-Lex

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2.2. Apparecchiatura
2.2.1. Spettrofotometro in grado di effettuare misurazioni a 340 nm, e
massimo di assorbimento dell'NADH.
In alternativa può essere impiegato un fotometro a spettro discontinuo
con lunghezza d'onda a 334 nm o a 365 nm.
Poiché si tratta di misurazioni assolute di assorbanza (senza curva di
taratura, ma con riferimento al coefficiente di estinzione del NADH),
occorre controllare le scale delle lunghezze d'onda e delle assorbanze
dell'apparecchio.
2.2.2. Celle di vetro con cammino ottico da 1 cm o celle monouso.
2.2.3. Micropipette per il prelievo di volumi compresi tra 0,02 e 2 ml.
2.3. Preparazione del campione
Evitare di toccare con le dita la parte di vetreria che viene a contatto
con il mezzo di reazione in quanto ciò potrebbe apportare acido Llattico
che falserebbe il risultato.
Se la concentrazione in acido lattico è inferiore a 100 mg/l, il dosaggio
del lattato si effettua in genere direttamente sul vino senza decolorazione
preliminare e senza diluizione. Se la concentrazione in acido
lattico è compresa tra:
100 mg/l e 1 g/l, diluire 1 / 10 con acqua bidistillata,
1 g/l e 2,5 g/l, diluire 1 / 25 con acqua bidistillata,
2,5 g/l e 5 g/l, diluire 1 / 50 con acqua bidistillata.
2.4. Modo di operare
2.4.1. Dosaggio dell'acido lattico totale
Prima di procedere al dosaggio la soluzione tampone deve essere
portata a 20-25 °C.
Regolato lo spettrofotometro sulla lunghezza d'onda di 340 nm,
effettuare le misure di assorbanza nelle celle da 1 cm, aggiustando l'apparecchio
allo zero di assorbanza contro aria (togliendo la cella dal
percorso ottico) o contro acqua.
Introdurre nelle celle da 1 cm:
bianco campione
soluzione 2.2.1 1,00 ml 1,00 ml
soluzione 2.1.2 0,20 ml 0,20 ml
acqua bidistillata 1,00 ml 0,80 ml
sospensione 2.1.3 0,02 ml 0,02 ml
campione — 0,20 ml
Mescolare mediante una bacchetta di vetro o di materiale sintetico
provvista di una estremità appiattita; dopo circa 5 minuti misurare le
assorbanze delle soluzioni del bianco e del campione (A 1 ).
Aggiungere 0,02 ml di soluzione 2.1.4 e 0,05 ml di soluzione 2.1.5,
omogeneizzare, attendere la fine della reazione circa 30 minuti
misurare le assorbanze delle soluzioni del bianco e del campione (A 2 ).
Determinare le differenze di assorbanza (A 2 − A 1 ) del bianco e del
campione.
Detrarre la differenza di assorbanza del bianco dalla differenza di
assorbanza del campione:
ΔA =ΔA C − ΔA B
1990R2676 — IT — 13.08.2005 — 011.001 — 105