01990R2676-20050813 - EUR-Lex

▼B
Determinare la differenza di assorbanza tra la prova in bianco (ΔA )ed T
il campione (ΔA ) e fissare:
D
per il glucosio: ΔA = ΔA − ΔA G C B
per il fruttosio: ΔA F = ΔA C − ΔA B
Osservazione:
il tempo necessario per l'azione degli enzimi può variare da un lotto
all'altro. Qui sopra è riportato soltanto a titolo indicativo. Si
raccomanda di determinarlo per ciascun lotto.
5.3. Espressione dei risultati
5.3.1. Calcolo
La formula generale per il calcolo delle concentrazioni è la seguente:
V ∙ PM
C ¼
Δ A ðg/lÞ ε ∙ d ∙ v ∙ 1 000
V = volume della soluzione impiegata per la prova (ml)
v = volume del campione (ml)
PM = massa molecolare della sostanza da dosare
d = cammino ottico della cella (cm)
ε = coefficiente di assorbimento dell'NADPH a 340 nm = 6,3 (m
mole−1 ∙ l ∙ cm−1 )
V = 2,92 ml per la determinazione del glucosio
V = 2,94 ml per la determinazione del fruttosio
v = 0,20 ml
PM = 180
d = 1
Si ottiene:
Per il glucosio: Cg/l = 0,417 ∙ ΔAG Per il fruttosio: Cg/l = 0,420 ∙ ΔA F
Se per preparare il campione, è stata effettuata una diluizione, moltiplicare
il risultato per il fattore F.
Osservazione:
Per misure effettuate alle lunghezze d'onda 334 o 365 nm si ottiene:
— misura a 334 nm: ε = 6,2 (m mole−1 ∙ l ∙ cm−1 )
per il glucosio: Cg/l = 0,425 ∙ ΔAG per il fruttosio: Cg/l = 0,428 ∙ ΔA F
— misura a 365 nm: ε = 3,4 (m mole−1 ∙ l ∙ cm−1 )
per il glucosio: Cg/l = 0,773 ∙ ΔAG per il fruttosio: Cg/l = 0,778 ∙ ΔA F
5.3.2. Ripetibilità (r)
r = 0,056 xi 5.3.3. Riproducibilità (R)
R = 0,12 + 0,076 xi = tenore in glucosio o fruttosio in grammi per litro
x i
1990R2676 — IT — 13.08.2005 — 011.001 — 73