01990R2676-20050813 - EUR-Lex

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▼B 2.4.2. Dosaggio dell'acido L-lattico e dell'acido D-lattico Il dosaggio dell'acido L-lattico e D-lattico può essere realizzato singolarmente applicando il modo di operare indicato per l'acido lattico totale, ma operando come segue una volta determinato A 1 : Aggiungere 0,02 ml di soluzione 2.1.4, omogeneizzare, aspettare la fine della reazione (circa 20 minuti) e misurare le assorbanze delle soluzioni del bianco e del campione (A 2 ). Aggiungere 0,05 ml di soluzione 2.1.5, omogeneizzare, attendere che la reazione abbia termine (30 minuti circa) e misurare le assorbanze delle soluzioni del bianco e del campione (A 3 ). Determinare le differenze di assorbanze (A 2 − A 1 ) per l'acido L-lattico e(A 3 − A 2 ) per l'acido D-lattico del bianco e del campione. Detrarre la differenza di assorbanza del bianco dalla differenza di assorbanze del campione: ΔA =ΔA C − ΔA B Nota: Il tempo necessario per l'azione degli enzimi può variare da un lotto all'altro. Qui viene riportato soltanto a titolo indicativo. Se ne raccomanda la determinazione per ciascun lotto. Quando si dosa soltanto l'acido L-lattico, il tempo di incubazione dopo l'addizione della L-lattato deidrogenasi può essere ridotto a 10 minuti. 2.5. Espressione dei risultati La concentrazione in acido lattico è espressa in grammi per litro (g/l) con una cifra decimale. 2.5.1. Procedimento di calcolo La concentrazione in grammi per litro si calcola mediante la formula generale: V ∙ PM C ¼ ∙ Δ A ε ∙ d ∙ v ∙ 1000 V = volume in ml della soluzione impiegata per la prova (V = 2,24 ml per l'acido L-lattico, V = 2,29 ml per l'acido Dlattico e per l'acido lattico totale) v = volume del campione in ml (in questo caso 0,2 ml) PM = peso molecolare della sostanza da dosare (in questo caso acido DL lattico = 90,08) d = cammino ottico della cella in cm (in questo caso 1 cm) ε = coefficiente di assorbanza dell'NADH a 340 nm, ε = 6,3 (mmole − 1 ∙ l ∙ cm − 1 ). 2.5.1.1. Acido lattico totale e acido D-lattico C = 0,164 ∙ ΔA Se per la preparazione del campione è stata effettuata una diluizione, moltiplicare il risultato per il fattore di diluizione. Avvertenza: Misura a 334 nm: C = 0,167 ∙ ΔA (ε = 6,2 mmole − 1 ∙ l ∙ cm − 1 ) Misura a 365 nm: C = 0,303 ∙ ΔA (ε = 3,4 mmole − 1 ∙ l ∙ cm − 1 ) 2.5.1.2. Acido L-lattico C = 0,160 ∙ ΔA Se per la preparazione del campione è stata effettuata una diluizione, moltiplicare il risultato per il fattore di diluizione. Avvertenza: misura a 334 nm: C = 0,163 ∙ ΔA (ε = 6,2 mmole − 1 ∙ l ∙ cm − 1 ) misura a 365 nm: C = 0,297 ∙ ΔA (ε = 3,4 mmole − 1 ∙ l ∙ cm − 1 ) 1990R2676 — IT — 13.08.2005 — 011.001 — 106
▼B ▼M8 2.5.2. Ripetibilità (r) r = 0,02 + 0,07 X g/l i Xi = concentrazione in acido lattico del campione espressa in grammi per litro 2.5.3. Riproducibilità (R) R = 0,05 + 0,125 X g/l i Xi = concentrazione in acido lattico del campione espressa in grammi per litro 1990R2676 — IT — 13.08.2005 — 011.001 — 107
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