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4.3.3-Determinação de porosidade, densidade e diâmetro das esferas. .......................... 49
3.4-CARACTERIZAÇÃO DA LACASE.............................................................................
50
3.4.1-determinação da massa molar da lacase................................................................
50
3.4.2-determinação da atividade enzimática....................................................................
50
3.4.3-determinação do melhor pH....................................................................................
51
3.4.4-propriedades cinéticas frente a diferentes substratos.............................................
51
3.4.5-estabilidade da lacase frente a inibidores...............................................................
51
3.4.6- Propriedades de termoestabilidade da lacase.......................................................
52
3.4.7-determinação de estabilidade da lacase frente pH alcalino...................................
52
3.4.8-determinação de estabilidade frente a solventes.....................................................
52
3.4.9-Determinação de estabilidade frente à estocagem..................................................
53
3.4.10-Efeito do uso repetido sobre a atividade residual da enzima imobilizada...........
53
3.5-OTIMIZAÇÃO DO PROCESSO DE IMOBILIZAÇÃO..............................................
53
3.5.1-Otimização do tempo necessário para promover a imobilização da enzima..........
53
3.5.1.1-determinação de proteínas totais.........................................................................
54
3.5.2-otimização da concentração de glutaraldeído para promover a ativação das
esferas...............................................................................................................................
54
PARTE 2: BIOTRANSFORMAÇÃO DE EFLUENTE DE INDÚSTRIA PAPELEIRA......
55
3.6-EFLUENTE....................................................................................................................
55
3.7-OTIMIZAÇÃO DO PROCESSO DE BIOTRANSFORMAÇÃO DO EFLUENTE
COM A ENZIMA IMOBILIZADA.....................................................................................
55
3.7.1-Determinação de fenóis totais.................................................................................
56
3.7.2-Determinação de cor...............................................................................................
56
3.8- MODIFICAÇÕES QUÍMICAS CAUSADAS NO EFLUENTE APÓS
TRATAMENTO COM A ENZIMA IMOBILIZADA.........................................................
56
3.8.1-determinação de fenóis totais de baixa MM...........................................................
57
3.8.2-característica da cor...............................................................................................
57
3.8.3-demanda bioquímica de oxigênio (DQO) ............................................................... 58
3.8.4-determinação de grupos ionizáveis utilizando titulação potenciométrica..............
58
3.9-BIOTRANSFORMAÇÃO DE COMPOSTOS FENÓLICOS APÓS TRATAMENTO
COM A ENZIMA IMOBILIZADA.....................................................................................
58
3.10-ANÁLISES ESTATÍSTICAS......................................................................................
59
4.0-RESULTADOS E DISCUSSÃO........................................................................................
60
PARTE 1: IMOBILIZAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA LACASE...................................
60
4.1-CARACTERIZAÇÃO DA QUITOSANA.....................................................................
60
4.1.1-Determinação do grau de desacetilação (GD) ....................................................... 60
4.2.2-Determinação da massa molar média (mmm) ........................................................ 63
4.2.2-Determinação da área específica............................................................................
64
4.2.3-Análise por espectroscopia de infravermelho (IV) .................................................. 65
4.3-PREPARAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DAS ESFERAS DE QUITOSANA...........
66
4.3.1-Preparação das esferas...........................................................................................
67
4.3.2-caracterização física das esferas ativadas..............................................................
68
4.4-OTIMIZAÇÃO DO PROCESSO DE IMOBILIZAÇÃO..............................................
70
4.5-CARACTERIZAÇÃO DA LACASE LIVRE
E IMOBILIZADA.................................
81
4.5.1-determinação do melhor pH....................................................................................
81
4.5.2-propriedades cinéticas frente a diferentes substratos.............................................
83
4.5.3-estabilidade frente A inibidores..............................................................................
86
4.5.4-propriedades de termoestabilidade.........................................................................
88
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