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4.3.3-Determinação de porosidade, densidade e diâmetro das esferas. .......................... 49 3.4-CARACTERIZAÇÃO DA LACASE............................................................................. 50 3.4.1-determinação da massa molar da lacase................................................................ 50 3.4.2-determinação da atividade enzimática.................................................................... 50 3.4.3-determinação do melhor pH.................................................................................... 51 3.4.4-propriedades cinéticas frente a diferentes substratos............................................. 51 3.4.5-estabilidade da lacase frente a inibidores............................................................... 51 3.4.6- Propriedades de termoestabilidade da lacase....................................................... 52 3.4.7-determinação de estabilidade da lacase frente pH alcalino................................... 52 3.4.8-determinação de estabilidade frente a solventes..................................................... 52 3.4.9-Determinação de estabilidade frente à estocagem.................................................. 53 3.4.10-Efeito do uso repetido sobre a atividade residual da enzima imobilizada........... 53 3.5-OTIMIZAÇÃO DO PROCESSO DE IMOBILIZAÇÃO.............................................. 53 3.5.1-Otimização do tempo necessário para promover a imobilização da enzima.......... 53 3.5.1.1-determinação de proteínas totais......................................................................... 54 3.5.2-otimização da concentração de glutaraldeído para promover a ativação das esferas............................................................................................................................... 54 PARTE 2: BIOTRANSFORMAÇÃO DE EFLUENTE DE INDÚSTRIA PAPELEIRA...... 55 3.6-EFLUENTE.................................................................................................................... 55 3.7-OTIMIZAÇÃO DO PROCESSO DE BIOTRANSFORMAÇÃO DO EFLUENTE COM A ENZIMA IMOBILIZADA..................................................................................... 55 3.7.1-Determinação de fenóis totais................................................................................. 56 3.7.2-Determinação de cor............................................................................................... 56 3.8- MODIFICAÇÕES QUÍMICAS CAUSADAS NO EFLUENTE APÓS TRATAMENTO COM A ENZIMA IMOBILIZADA......................................................... 56 3.8.1-determinação de fenóis totais de baixa MM........................................................... 57 3.8.2-característica da cor............................................................................................... 57 3.8.3-demanda bioquímica de oxigênio (DQO) ............................................................... 58 3.8.4-determinação de grupos ionizáveis utilizando titulação potenciométrica.............. 58 3.9-BIOTRANSFORMAÇÃO DE COMPOSTOS FENÓLICOS APÓS TRATAMENTO COM A ENZIMA IMOBILIZADA..................................................................................... 58 3.10-ANÁLISES ESTATÍSTICAS...................................................................................... 59 4.0-RESULTADOS E DISCUSSÃO........................................................................................ 60 PARTE 1: IMOBILIZAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DA LACASE................................... 60 4.1-CARACTERIZAÇÃO DA QUITOSANA..................................................................... 60 4.1.1-Determinação do grau de desacetilação (GD) ....................................................... 60 4.2.2-Determinação da massa molar média (mmm) ........................................................ 63 4.2.2-Determinação da área específica............................................................................ 64 4.2.3-Análise por espectroscopia de infravermelho (IV) .................................................. 65 4.3-PREPARAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DAS ESFERAS DE QUITOSANA........... 66 4.3.1-Preparação das esferas........................................................................................... 67 4.3.2-caracterização física das esferas ativadas.............................................................. 68 4.4-OTIMIZAÇÃO DO PROCESSO DE IMOBILIZAÇÃO.............................................. 70 4.5-CARACTERIZAÇÃO DA LACASE LIVRE E IMOBILIZADA................................. 81 4.5.1-determinação do melhor pH.................................................................................... 81 4.5.2-propriedades cinéticas frente a diferentes substratos............................................. 83 4.5.3-estabilidade frente A inibidores.............................................................................. 86 4.5.4-propriedades de termoestabilidade......................................................................... 88 16
4.5.5-determinação de estabilidade frente a solventes..................................................... 90 4.5.6- Estabilidade operacional da enzima imobilizada.................................................. 94 PARTE 2-TRATAMENTO DO EFLUENTE DE UMA INDÚSTRIA DE PAPEL E CELULOSE.............................................................................................................................. 97 4.6- OTIMIZAÇÃO DO PROCESSO DE BIOTRANSFORMAÇÃO DO EFLUENTE COM A ENZIMA IMOBILIZADA..................................................................................... 97 4.7- MODIFICAÇÕES QUÍMICAS CAUSADAS NO EFLUENTE APÓS TRATAMENTO COM A ENZIMA IMOBILIZADA....................................................... 100 4.7.1- NATUREZA QUÍMICA DA COR DOS EFLUENTES, ANTES E APÓS TRATAMENTO ENZIMÁTICO....................................................................................... 104 4.8- AVALIAÇÃO DA BIOTRANSFORMAÇÃO DE COMPOSTOS FENÓLICOS APÓS TRATAMENTO COM A ENZIMA IMOBILIZADA....................................................... 107 5.0-CONCLUSÕES................................................................................................................ 111 6.0-RECOMENDAÇÕES PARA TRABALHOS FUTUROS............................................... 113 7.0-REFERÊNCIAS...............................................................................................................114 ANEXO A - CURVA DE CALIBRAÇÃO PARA DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS.................................................................................................................................. 125 ANEXO B - CURVA DE CALIBRAÇÃO PARA DETERMINAÇÃO DE FENÓIS TOTAIS (MÉTODO FOLIN) E FENÓIS DE BAIXA MM (MÉTODO 4-AAP) ................................ 127 ANEXO C: CURVA DE CALIBRAÇÃO PARA DETERMINAÇÃO DE DQO................. 130 17
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R O OH (b2) Esquema 4: Principais e
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AQUINO, S. Caracterização da DQO
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Disponível em Acesso em 15 de jul
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GOY, R.C.; ASSIS, O.B.G.; CAMPANA-F
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MAYER, A.M. Polyphenol oxidases in
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SERVILLI, M. et al. A novel method
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PREPARO DAS SOLUÇÕES A) Solução
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