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4.5-CARACTERIZAÇÃO DA LACASE LIVRE E IMOBILIZADA
O primeiro parâmetro determinado para a lacase livre foi a MM, que por sua vez foi
determinada por HPLC. Através dos cromatogramas e comparando-se com o padrão utilizado,
foi possível observar que a enzima detinha uma MM de aproximadamente 65 kDa. Esse valor
condiz com os demais valores apresentados para as lacases fúngicas na literatura
(LEONTIEVSKY et al., 1997, HEINZKILL et al., 1998, LEONOWICZ e BOLLAG, 1987).
Além da MM, também foram determinados outros parâmetros que podem expressar as
possíveis mudanças nas propriedades enzimáticas após o processo de imobilização, ou seja,
apesar da reconhecida superioridade das enzimas imobilizadas frente às livres, o processo de
imobilização pode modificar a cinética e as propriedades físico-químicas da enzima,
normalmente reduzindo sua atividade específica. Várias são as mudanças descritas sobre as
propriedades das enzimas, sendo que estas são causadas principalmente em função fatores
como: (a) efeitos conformacionais; (b) efeitos estereoquímicos; (c) efeitos microambientais e
(d) efeitos difusionais ou de transferência de massa (ZANIN e MORAES, 2004). Com o
objetivo de detectar as possíveis mudanças nas propriedades enzimáticas após o processo de
imobilização, foram realizados experimentos citados nas seções 4.4.3 à 4.48 e discutidos a
seguir.
4.5.1-DETERMINAÇÃO DO MELHOR PH
O perfil de atividade versus pH da enzima livre e imobilizada foi realizado conforme
descrito no item 4.4.3. Os resultados estão ilustrados na Figura 24, onde foi possível observar
que o processo de imobilização provocou mudanças no pH ótimo da enzima. A enzima livre
apresentou maior atividade em pH=4,0, enquanto a mesma imobilizada apresentou maior
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