(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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득할 수 있으며, 예컨대 하이브리도마법은 문헌 Kohler, G., et al., Nature 256:495, 1975에 있으며, 이들은
재조합 DNA법에 의하여 생산될 수도 있다 (예컨대, U.S. Patent No. 4,816,567, Cabilly). 단클론 항체는 파
지 항체 라이브러리로부터 분리될 수 있으며, 이는 Clackson, T., et al., Nature 352:624-628, 1991, 및
Marks, J.D., et al., J. Mol. Biol. 222:581-597, 1991에 설명되어 있다. 이러한 항체는 IgG, IgM, IgE,
IgA, IgD 및 이들의 모든 하위클래스를 포함하는 모든 면역글로블린 클래스가 될 수 있다.
예를 들면, 단클론 항체는 적합한 포유류 (예컨대, BALB/c 마우스)에 MASP-2 폴리펩티드 또는 이들의 부분을
포함하는 조성물을 주입함으로써 획득할 수 있다. 미리 결정한 시간 후에, 비장세포를 마우스에서 제거하고
세포 배양 배지에 현탁시켰다. 비장세포를 무한증식 세포주에 융합시켜 하이브리도마를 형성하였다. 형성된
하이브리도마를 세포 배양에서 성장시키고 MASP-2에 대한 단클론 항체를 생산하는 능력으로 선별하였다. 항-
MASP-2 단클론 항체의 생산을 설명하는 추가적인 예는 실시예 7에 제공되어 있다 (Current Protocols in
Immunology, Vol. L, John Wiley & Sons, pages 2.5.1-2.6.7, 1991.).
인간 단클론 항체는 항원 시험에 대한 반응에서 특이적 인간 항체를 생산하도록 조작된 유전자삽입 마우스를
사용하여 획득할 수 있다. 이 기법에서, 인간 면역글로블린 중쇄 및 경쇄좌의 요소가 내재 면역글로블린 중쇄
및 경쇄좌의 표적화된 분열을 함유하는 배아 줄기 세포주에서 유도된 마우스 주 내로 도입되었다. 유전자삽입
마우스는 예컨대 MASP-2 항원인 인간 항원에 특이적인 인간 항체를 합성할 수 있으며, 마우스는 실시예 7에서
추가적으로 설명된 종래의 콜러-밀스턴 기술을 사용하여 다발골수종 세포주에 적합한 동물의 B-세포에 융합하
여 인간 MASP-2 항체-분비 하이브리도마를 생성하기 위하여 사용될 수 있다. 인간 면역글로블린 게놈의 유전
자삽입 마우스는 구득이 가능하다 (예컨대, from Abgenix, Inc., Fremont, CA, and Medarex, Inc.,
Annandale, N. J.). 유전자삽입 마우스에서 인간 항체를 얻는 방법은, 예를 들면, Green, L.L., et al.,
Nature Genet. 7:13, 1994; Lonberg, N., et al., Nature 368:856, 1994; 및 Taylor, L.D., et al., Int.
Immun. 6:579, 1994에 설명되어 있다.
단클론 항체는 다양한 확립된 기법에 의하여 하이브리도마 배양액으로부터 분리되고 정제될 수 있다. 이러한
분리 기법은 단백질-A 세파로스에의한 친화도 크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피, 및 이온-교환 크로
마토그래피를 포함한다 (예를 들면, Coligan at pages 2.7.1-2.7.12 및 pages 2.9.1-2.9.3; Baines et al.,
"Purification of Immunogloblin G (IgG)," in Methods in Molecular Biology, Humana Press, Inc., Vol. 10,
pages 79-104, 1992). 생산된 경우라면, 다클론, 단클론 또는 파지-유도성 항체는 특이적 MASP-2 결합이 시험
된다. 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지된 다양한 측정법이 MASP-2에 특이적으로 결합된 항체를 검출하기 위
하여 사용된다. 예시적인 측정법은 웨스턴 블롯 또는 표준 방법에 의한 면역침전 분석 (예컨대, Ausubel et
al.), 면역전기영동, 효소-링크 면역측정법, 도트 블롯, 억제 또는 경쟁 측정법 및 샌드위치 측정법을 포함한
다 (Harlow and Land, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988). 항체
가 MASP-2에 특이적으로 결합한다고 알려진 경우, 항-MASP-2 항체는 수종의 측정법 예컨대, 예를 들면, 렉틴-
특이적 C4 분열 측정법 (실시예 2), C3b 침착 측정법 (실시예 2) 또는 C4b 침착 측정법 (실시예 2)에서 MASP-
2 억제제로서 기능하는 능력에 대하여 시험된다.
항-MASP-2 단클론 항체의 친화도는 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 쉽게 결정될 수 있다 (예컨대,
Scatchard, A., NY Acad. ScL 57:660-672, 1949). 본 발명의 일 실시형태에서, 본 발명에 유용한 항-MASP-2
단클론 항체는 < 100nM, 바람직하게는 < 10nM 및 가장 바람직하게는 < 2nM의 결합 친화도로 MASP-2에 결합한
다.
키메라/인체적응형 항체
본 발명의 방법에 유용한 단클론 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 부분이 특정 종에서 유도된 항체 또는 특정 항
체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 대응 서열에 일치하거나 또는 상동인이나 사슬 (들)의 나머지
는 또 다른 종에서 유도된 항체 또는 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스항체, 및 이러한 항체의 단편 내의
대응 서열과 일치하거나 또는 상동인 키메라 항체를 포함한다 (U.S. Patent No. 4,816,567 to Cabilly, 및
Morrison, S. L., et al., Proc. Nat'lAcad. ScL USA 87:6851-6855, 1984).
공개특허 10-2012-0099680
본 발명에 유용한 일 형태의 키메라 항체는 인체적응형 단클론 항-MASP-2 항체이다. 인체적응형의 비-인간
(예컨대, 뮤린) 항체는 키메라 항체이며, 이는 비-인간 면역글로블린에서 유도된 최소 서열을 함유한다. 인체
적응형 단클론 항체는 비-인간 (예컨대, 마우스) 상보 결정 영역 (CDR)을 마우스 면역글로블린의 중쇄 및 경
쇄 가변 사슬에서 인간 가변 도메인으로 전이시킴으로써 생산된다. 일반적으로, 인간 항체의 잔기는 비-인간
상대방의 프레임워크 영역 내에서 치환되었다. 추가적으로, 인체적응형 항체는 수여자 항체 또는 공여자 항체
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