(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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예방적 응용에서, 약학적 조성물은 질병의 증상을 발달시킬 위험을 제거 또는 감소시키기 충분한 양으로
MASP-2-의존성 보체 활성화에 관계된 증상에 걸리기 쉬운 또는 걸릴 위험이 있는 대상체에 투여된다. 치료적
응용에서, 약학적 조성물은 질병의 증상을을 감경 또는 최소한 부분적으로 감소시키기에 충분한 치료학적 유
효량으로 MASP-2-의존성 보체 활성화에 관련된 증상이 의심되거나 또는 이미 걸려있는 대상체에 투여된다. 예
방적 및 치료적 요법 모두에 있어서, MASP-2 억제제를 포함하는 조성물은 대상체 내에서 충분한 치료적 결과
가 달성될 때까지 수종의 투약량으로 투여될 수 있다. MASP-2 억제 본 발명의 조성물의 적용은 급성 증상, 예
컨대, 재관류 손상 또는 다른 외상성 손상의 치료를 위하여 조성물의 단일 투여, 또는 제한된 순서의 투여에
의하여 달성된다. 대안적으로, 조성물은 만성 증상, 예컨대, 관절염 또는 건선의 치료를 위하여 시간적 간격
을 두고 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물 및 방법은 일반적으로 진단적 및 치료적 의학적 및 외과적 수술에 의한 염증 및 유관 진행
에 사용될 수 있다. 이러한 진행을 억제하기 위하여, 본 발명의 MASP-2 억제 조성물은 수술 전후적으로 사용
될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이 "수술 전후적으로"는 수술전 및/또는 수술중 및/또는 수술후, 즉, 수
술 전에, 수술 전 및 도중에, 수술 전 및 후에, 수술 전, 후 및 도중에, 수술 중에, 수술 중 및 후에, 또는
수술 후에 억제 조성물을 투여한다는 것이다. 수술 전후 적용은 외과적 또는 수술 부위에 조성물의 국부
투여, 예컨대 상기 부위의 주사 또는 계속적 또는 간헐적 관류 또는 전신 투여에 의하여 수행될 수 있다.
MASP-2 억제제 용액의 국부 수술 전후 전달에 적합한 방법은 US Patent No. 6,420,432, Demopulos 및
6,645,168, Demopulos에 개시되어 있다. MASP-2 억제제 (들)을 포함하는 연골보호제 조성물의 국부 전달에 적
합한 방법은 PCT 특허 출원 WO 01/07067 A2에 개시되어 있다. MASP-2 억제제 (들)을 포함하는 연골보호제의
전신 전달에 적합한 방법 및 조성물은 PCT 특허 출원 WO 03/063799 A2에 개시되어 있다.
VI. 실시예
다음의 실시예는 본 발명의 실시에 대한 최선의 방법을 설명하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위를 제한하
는 것을 아니다. 본원에서 인용한 모든 문헌은 참고자료로서 명백히 포함되어 있다.
실시예 1
이 실시예는 MASP-2 (MASP-2-/-)이 결핍이나 MApl9 (MApl9+/+)는 충분한 마우스 주의 생성을 설명한다.
재료 및 방법: 표적화 벡터 pKO-NTKV 1901은 세린 프로테아제 도메인을 암호화하는 엑손을 포함하는 뮤린
MASP-2의 C-말단을 암호화하는 3개의 엑손을 파괴시키도록 설계되었다 (도 4). PKO-NTKV 1901는 뮤린 ES 세포
주 E14.1a (SV129 Ola)를 전달감염시키기 위하여 사용되었다. 네오마이신-저항성 및 티미딘 키나아제-민감성
클론이 선택되었다. 600 ES 클론을 선별하였으며, 여기서, 4개의 다른 클론을 확인하고 및 서던 블롯에 의하
여 기대된 선택적 표적화 및 재조합 (도 4)을 함유한다는 것을 입증하였다. 키메라는 배아 전이에 의하여 이
러한 4개의 양성 클론으로부터 생성되었다. 키메라를 유전적 배경 C57/BL6 내에서 역교배시켜 유전자삽입 수
컷을 생산하였다. 유전자삽입 수컷을 암컷과 교배시켜 50%의 자손이 파괴된 MASP-2 유전자의 이형접합을 나타
내는 F1을 생성시켰다. 이종접합 마우스를 이종교배시켜 동종접합 MASP-2 결핍 자손을 생성하였으며, 그 결과
이종접합 및 야생형 마우스가 각각 1:2:1의 비율로 나타났다.
결과 및 표현형: 결과 동종접합 MASP-2-/- 결핍 마우스는 생활성이며 임신가능한 것으로 밝혀졌으며, 정확한
표적화를 확인하기 위한 서던 블롯, MASP-2 mRNA의 부재를 확인하기 위한 노던 블롯, 및 MASP-2 단백질의 부
재를 확인하기 위한 웨스턴 블롯에 의하여 MASP-2 결핍을 입증하였다 (데이터 미도시). MApl9 mRNA의 존재 및
MASP-2 mRNA의 부재는 LightCycler 기기상에서 시간-용해 RT-PCR을 사용하여 추가로 확인하였다. MASP-2-/-
마우스는 기대하는 바와 같이 MAp19, MASP-1, 및 MASP-3 mRNA 및 단백질을 계속 발현하지 않았다 (데이터 미
도시). 프로퍼딘, 인자 B, 인자 D, C4, C2, 및 C3용 MASP-2-/- 마우스 내의 mRNA의 존재 및 부재는
LightCycler 분석에 의하여 평가되었으며, 야생형 한배자손 대조군의 것과 일치하였다 (데이터 미도시). 동종
접합 MASP-2-/- 마우스의 혈장은 렉틴-경로-매개 보체 활성화 및 대체 경로 보체 활성화가 전체적으로 결핍되
었다 (실시예 2).
순수 C57BL6 배경상의 MASP-2-/- 주의 생성: 실험 동물 모델로서 MASP-2-/- 주를 사용하기 전에 9마리를 생성
하기 위하여 MASP-2-/- 마우스를 순수 C57BL6 주와 역교배시켰다.
실시예 2
이 실시예는 MASP-2가 대체 및 렉틴 경로를 통한 보체 활성화에 필요하다는 것을 입증한다.
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공개특허 10-2012-0099680