(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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있다. 대안으로서, 펩신을 사용한 효소적 분열은 두 1가 Fab 단편 및 Fc 단편을 직접적으로 생산한다. 이러한
방법은, 예를 들면, U.S. Patent No. 4,331,647 to Goldenberg; Nisonoff, A., et al., Arch. Biochem.
Biophys. 89:230, 1960; Porter, R.R., Biochem. J. 73:119, 1959; Edelman, et al., in Methods in
Enzymology, 1:422, Academic Press, 1967; 및 by Coligan at pages 2.8.1-2.8.10 및 2.10.-2.10.4에 설명되
어 있다.
일 실시형태에서, Fc 영역이 부재한 항체 단편의 사용은 Fc와 Fcγ 수용체의 결합에 의하여 개시되는 고전적
보체 경로의 활성화를 회피하기에 바람직하다. Fcγ 수용체 상호작용을 회피하는 MoAb을 생산할 수 있는 수종
의 방법이 있다. 예를 들면, 단클론 항체의 Fc 영역은 단백질분해 효소의 소화에 의하여 화학적으로 제거될
수 있으며 (예컨대 피신 소화), 따라서, 예를 들면, 항원-결합 항체 단편 예컨대 Fab 또는 F (ab)2 단편을 생
성한다 (Mariani, M., et al., Mol. Immunol. 28:69-11, 1991). 대안적으로, Fcγ 수용체에 결합하지 않는 인
간 γ4IgG 아이소타입이 본원에서 설명한 인체적응형 항체의 구축시 사용될 수 있다. 항체, 단일 사슬 항체
및 Fc 도메인이 부재한 항원-결합 도메인이 본원의 재조합 기법을 사용하여 조작될 수 있다.
단일-사슬 항체 단편
대안적으로, 중쇄 및 경쇄 Fv 영역이 연결된, MASP-2에 특이적인 단일 펩티드 사슬 결합 분자를 생성할 수 있
다. Fv 단편은 펩티드 링커에 의하여 연결되어 단일-사슬 항원 결합 단백질을 형성할 수 있다 (scFv). 이러한
단일-사슬 항원 결합 단백질은 올리고뉴클레오티드에 의하여 연결된 VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA 서열
을 포함하는 구조 유전자를 구축함으로써 제조될 수 있다. 구조 유전자는 발현 벡터 내로 삽입되고, 이는 후
속적으로 숙주 세포, 예컨대 이. 콜리 (E. coli)에 도입된다. 재조합 숙주 세포는 두 V 도메인을 연결하는 링
커 펩티드를 지닌 단일 폴리펩티드 사슬을 합성한다. scFvs를 생산하는 방법은 예를 들면, Whitlow, et al.,
"Method: A Companion to Methods in Enzymology" 2:97, 1991; Bird, et al., Science 242:423, 1988; U.S.
Patent No. 4,946,778, Ladner; Pack, P., et al., Bio/Technology 77:1271, 1993에 설명되어 있다.
설명적 실시예로서, MASP-2 특이적 scFv는 시험관 내애서 림프구를 MASP-2 폴리펩티드에 노출시키고, 파지 또
는 유사 벡터 내에서 항체 디스플레이 라이브러리를 선택함으로써 획득할 수 있다 (예를 들면, 고정화 또는
표지화 MASP-2 단백질 또는 펩티드를 사용하여). 잠재적인 MASP-2 폴리펩티드 결합 도메인을 보유한 폴리펩티
드를 암호화하는 유전자는 파지 또는 박테리아 예컨대 이. 콜리 (E. coli) 상에 디스플레이된 무작위 펩티드
라이브러리를 선별함으로써 획득할 수 있다. 이러한 무작위 펩티드 디스플레이 라이브러리는 MASP-2와 상호작
용하는 펩티드의 선별에 사용될 수 있다. 무작위 펩티드 디스플레이 라이브러리를 생성하고 선별하는 기법이
당해 기술 분야에 공지되어 있으며 (U.S. Patent No. 5,223,409, Lardner; U.S. Patent No. 4,946,778,
Ladner; U.S. Patent No. 5,403,484, Lardner; U.S. Patent No. 5,571,698, Lardner; 및 Kay et al., Phage
Display of Peptide and Protein Academic Press, Inc., 1996) 및 무작위 펩티드 디스플레이 라이브러리 및
이러한 라이브러리 선별 키트를 구득할 수 있으며, 예컨대, CLONTECH Laboratories, Inc. (Palo Alto,
Calif.), Invitrogen Inc. (San Diego, Calif.), New England Biolabs, Inc. (Beverly, Mass.), 및 Pharmacia
LKB Biotechnology Inc. (Piscataway, NJ.)가 있다.
본 발명의 특징에 유용한 항-MASP-2 항체 단편의 또 다른 형태는 MASP-2 항원상의 에피토프에 결합하고,
MASP-2-의존성 보체 활성화를 억제하는 단일 상보-결정 영역 (CDR)을 암호화하는 펩티드이다. CDR 펩티드 ("
최소 인식 유닛")는 대상 항체의 CDR을 암호화하는 유전자를 구축함으로써 획득할 수 있다. 이러한 유전자는,
예를 들면, 항체-생산 세포의 RNA 가변 영역을 합성하기 위한 폴리머라아제 사슬 반응을 사용하여 제조될 수
있다 (예를 들면, Larrick et al., Method: A Companion to Methods in Enzymology 2:106, 1991; Courtenay-
Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Production,
Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), page 166, Cambridge University Press,
1995; 및 Ward et al., "Genetic Manipulation and Express of Antibodies," in Monoclonal Antibodies:
Principles and Applications, Birch et al. (eds.), page 137, Wiley-Liss, Inc., 1995).
본원의 MASP-2 항체는 MASP-2-의존성 보체 활성화를 억제하기 위하여 이들이 필요한 대상체에 투여된다. 일
실시형태에서, MASP-2 억제제는 감소된 효과기 기능를 지닌 고-친화도 인간 또는 인체적응형 단클론 항-MASP-
2 항체이다.
펩티드 억제제
공개특허 10-2012-0099680
본 발명의 다른 양태로써, MASP-2 억제제는 MASP-2-의존성 보체 활성화 시스템을 억제하는 분리된 천연 펩티
드 억제제 및 합성 펩티드 억제제를 포함하는 분리된 MASP-2 펩티드 억제제를 포함한다. 본원에서 사용된 바
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