(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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백질 싸이클린, 다중 약제 억제 유전자 (MDG1), ICAM-1, E-세렉틴, STK-I, 줄무늬 GABAA 수용체 및 인간 EGF
로 입증되었다 (예컨대, U.S. Patent No. 5,801,154, Baracchini; U.S. Patent No. 5,789,573, Baker; U.S.
Patent No. 5,718,709, Considine; 및 U.S. Patent No. 5,610,288, Reubenstein).
시스템은 당해 기술 분야의 숙련자가 전사 내의 서열 접근성의 지표로서 RNA분해효소 H 분열을 사용하여 표적
mRNA 내의 적합한 부위용 프로브에 관한 올리고뉴클레오티드가 본 발명에 유용한지 여부를 결정하기 위하여
사용된다. Scherr, M., et al, Nuclear Acids Res. 2 (5:5079-5085, 1998; Lloyd, et al., Nuclear Acids
Res. 29:3665-3673, 2001. MASP-2 전사의 특정 영역에 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오티드의 혼합물을
MASP-2를 발현하는 세포 추출물, 예컨대 간세포에 첨가하고, RNA분해효소 H 취약 부위를 생성하기 위하여 혼
성화하였다. 이 방법은 숙주 세포 내에서 표적 mRNA 내에서 특이적 결합을 감소 또는 억제할 수 있는 이합체,
헤어핀, 또는 다른 2차 구조를 형성하는 상대적인 이들의 능력에 기초하여 안티센스 조성물의 최적 서열 선택
을 예견할 수 있는 컴퓨터-보조 서열 선택과 결합될 수 있다. 이러한 2차 구조 분석 및 표적 부위 선택 고려
사항은 올리고 프라이머 분석 소프트웨어 (Rychlik, L, 1997) 및 BLASTN 2.0.5 알고리즘 소프트웨어
(Altschul, S.F., et al, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402, 1997)를 사용하여 수행할 수 있다. 표적 서열에 관
한 안티센스 화합물은 바람직하게는 약 8 내지 약 50개 길이의 뉴클레오티드를 포함한다. 약 9 내지 약 35개
의 뉴클레오티드를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드가 특히 바람직하다. 발명자들은 9 내지 35개 뉴클
레오티드 범위의 모든 올리고뉴클레오티드 조성물 (즉, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,
22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35개의 염기 길이)이 본 발명의 안티센스 올리고
뉴클레오티드-기초 방법의 실시에 매우 바람직하다고 고려한다. 매우 바람직한 MASP-2 mRNA의 표적 영역은
AUG 번역 개시 코돈, 및 mRNA의 5' 영역에 실질적으로 상보인 서열, 예컨대, MASP-2 유전자 뉴클레오티드 서
열 (SEQ ID NO:4)의 -10 및 +10 영역 사이에 있거나 그 주변에 있는 것이다. 예시적인 MASP-2 발현 억제제는
표 4에 제공되었다.
표 4: MASP-2의 예시적인 발현 억제제
SEQ ID NO:30
(SEQ ID NO:4의 뉴클레오티드 22-680)
SEQ ID NO:31
5'CGGGCACACCATGAGGCTGCTG
ACCCTCCTGGGC3'
SEQ ID NO:32
5'GACATTACCTTCCGCTCCGACTC
CAACGAGAA3'
SEQ ID NO:33
5'AGCAGCCCTGAATACCCACGGCC
GTATCCCAAA3'
표 4
CUBIEGF를 암호화한 MASP-2 cDNA의 핵산 서열
(SEQ ID NO:4)
MASP-2 번역 개시 부위 (센스)를 포함하는 SEQ ID
NO:4의 뉴클레오티드 12-45
MASP-2 MBL 결합 부위 (센스)를 포함하는 영역을
암호화하는 SEQ ID NO:4의 뉴클레오티드 361-396
CUBII 도메인능 포함하는 영역을 암호화하는 SEQ
ID NO:4의 뉴클레오티드 610-642
전에 사용된 바와 같이, 용어 "올리고뉴클레오티드"는 본원에서 사용된 바와 같이 리보핵산 (RNA) 또는 데옥
시리보핵산 (DNA) 또는 이들의 모사체 올리고머 또는 중합체를 의미한다. 이 용어는 자연 발생 뉴클레오티드,
당 및 뉴클레오시드간 공유 (골격) 결합 및 비-자연 발생적 변형을 보유한 올리고뉴클레오티드로 구성된 올리
고핵염기를 포함한다. 이러한 변형은 자연 발생 올리고뉴클레오티드, 예컨대 감소된 독성, 뉴클레아제 분해에
대한 증가된 안정성 및 증가된 세포성 흡인을 통하여 제공되지 않는 어떠한 바람직한 특성을 도입할 수 있도
록하는 것이다. 예시적 실시형태에서, 본 발명의 안티센스 화합물은 포스페이트 치환제가 포스포로티오에이트
에 의하여 대체된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 생존을 연장시키기 위하여 포스포디에스터 골격을 변형한다
는 점에서 천연 DNA와 다르다. 이와 같이, 올리고뉴클레오티드의 한 또는 양 말단은 핵산 가닥 내의 인접 염
기쌍 사이에 개재되는 하나 이상의 아크리딘 유도체에 의하여 치환될 수 있다.
공개특허 10-2012-0099680
안티센스의 또 다른 대체물은 "RNA 간섭" (RNAi)를 사용하는 것이다. 이중-가닥 RNAs (dsRNAs)는 생체 내에서
포유류 내의 유전자 스플라이싱을 유발시킬 수 있다. RNAi의 천연 기능 및 보조-억제는 이동 유전 요소 예컨
대 래트로트랜스포손 및 활성화되는 경우 숙주 세포 내에서 변종 RNA 또는 dsRNA를 생산하는 바이러스에 의한
침입에 대하여 게놈을 보호하는 것 같다 (예컨대, Jensen, J., et al., Nat. Genet. 21:209-12, 1999). 이중-
가닥 RNA 분자는 각각 길이가 약 19 내지 25개 (예컨대, 19-23 뉴클레오티드)인 이중-가닥 RNA 분자를 형성할
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