(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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용하여 감염과 싸우기 위한 환자의 능력을 양보하지 않고 MASP-2 억제에 의해 외상환자들에서 원하지 않는 염
증성 합병증을 감소시키는 것이 가능하다는 것을 가리킨다.
실시예 38
이 실시예는 실시예 24에서 설명된 바와 같이 확인된 대표적인 높은 친화도의 항-MASP-2 Fab2 항체의 약동학
적 분석을 설명한다.
배경/이론적 근거:
실시예 24에서 설명된 바와 같이, 래트 렉틴 경로를 차단하는 높은 친화도의 항체를 확인하기 위해, 래트
MASP-2 단백질을 이용하여 파지 디스플레이 라이브러리를 팬하였다. 이 라이브러리는 높은 면역학적 다양성을
제공하기 위해 설계되었고 전체 인간 면역글로블린 유전자 서열을 사용하여 구성되었다. 실시예 24에서 보여
지는 바와 같이, 높은 친화도로 ELISA 스크리닝에 의해 래트 MASP-2 단백질에 결합한 약 250개의 개개 파지
클론이 확인되었다. 이 클론들의 서열 결정은 50개의 독특한 MASP-2 항체 암호화 파지를 확인하였다. Fab2 단
백질은 이 클론들로부터 발현되고, 정제되고 MASP-2 결합 친화도 및 렉틴 보체 경로의 기능적 억제에 대해
분석하였다.
실시예 24의 표 6에서 보이는 바와 같이, 기능적 차단 활성을 갖는 17개의 항-MASP-2 Fab2가 이 분석의 결과
로서 확인되었다 (차단 항체에 대해 34% 적중률). 렉틴 보체 경로의 Fab2에 의한 기능적 억제는 C4 침착의 수
준에서 분명했는데, 이것은 MASP-2에 의한 C4 분열의 직접적 측정이다. 중요하게도, C3 전환효소 활성이 평가
될 때 억제는 동일하게 분명했는데, 렉틴 보체 경로의 기능적 봉쇄를 증명한다. 실시예 24에서 설명된 바와
같이 확인된 17개의 MASP-2 차단 Fab2는 잠재적으로 10 nM 이하의 IC50 값으로 C3 전환효소의 형성을 강력히
억제한다. 확인된 17 Fab2들 중 8개는 서브나노몰 범위에서 IC50 값을 갖는다. 게다가 모든 17개의 MASP-2 차
단 Fab2들은 도 11a 내지 11b에서 보이는 바와 같이, 렉틴 경로 C3 전환효소 검정에서, C3 전환효소 형성의
본질적으로 완전한 억제를 주었고, 실시예 24의 표 6에 요약되었다. 더욱이 표 6에 보이는 17개의 차단 항-
MASP-2 Fab2들 각각은 C3b 생성을 강력히 억제하고 (95% 초과), 따라서 렉틴 경로 C3 전환효소에 대한 이 검
정의 특이성을 증명한다.
래트 IgG2c 및 마우스 IgG2a 전체 길이 항체의 아이소타입 변종은 Fab2 #11에서 파생되었다. 이 실시예는 약
동학적 파라미터에 대해 이들 아이소타입들에 대한 생체 내에서 특징을 설명한다.
방법:
실시예 24에서 설명된 바와 같이, 래트 MASP-2 단백질을 이용하여 Fab 파지 디스플레이 라이브러리를 팬하였
고, 그로부터 Fab2 #11이 확인되었다. 래트 IgG2c 및 마우스 IgG2a 전체 길이 항체 아이소타입 변종은 Fab2
#11에서 파생되었다. 래트 IgG2c 및 마우스 IgG2a 둘 다 전체 길이 항체 아이소타입은 생체 내에서 약동학적
파라미터에 대해 다음과 같이 특징지어졌다.
마우스의 생체 내 연구
약동학적 연구는 생체 내에서 혈장 렉틴 경로 활성에 투여한 항-MASP-2 항체의 효과를 조사하기 위해 마우스
에서 수행되었다. 이 연구에서는, C4 침착은 마우스 항-MASP-2 Mo 항체 (Fab2#11로부터 유도된 마우스 IgG2a
전체-길이 항체 아이소타입) 0.3 mg/kg 또는 1.0 mg/kg을 피하 (sc) 및 복강 내 (ip) 투여 후 다양한 시점에
서 렉틴 경로 검정으로 생체 밖에서 측정되었다.
도 36은 생체 밖에서 마우스 항-MASP-2 Mo 항체 0.3 mg/kg 또는 1.0 mg/kg을 피하 내에 투여 후 다양한 시점
에서 마우스로부터 (n=3 마우스/그룹) 얻은 희석되지 않은 혈청 샘플에서 측정된 렉틴 경로 특이적 C4b의 침
착을 그래프로 예시한다. 100 nM의 같은 차단 항-MASP-2 항체를 시험관 내에 보충한 혈청을 양성 대조군 (0%
활성)으로 사용한 반면, 항체 투여 전 마우스로부터 수집된 혈청 샘플은 음성 대조군 (100% 활성)으로 제공되
었다.
공개특허 10-2012-0099680
도 36에서 보이는 결과는 마우스 항-MASP-2 Mo항체 1.0 mg/kg의 피하 투여 후 C4b 침착의 빠르고 완전한 억제
를 증명한다. C4b 침착의 부분적 억제는 마우스 항-MASP-2 Mo항체의 0.3 mg/kg의 피하 투여 후에 보였다.
렉틴 경로 회복의 시간 경과는 마우스에 0.6 mg/kg으로 마우스 항-MASP Mo항체를 일회 복강 내 투여 후 3주
동안 진행되었다. 도 37에서 보이는 바와 같이, 항체 투여 후에 일어난 렉틴 경로 활성의 급격한 하락은 완
전한 렉틴 경로 억제로 이어졌는데 복강 내 투여 후 약 7일 동안 지속 되었다. 렉틴 경로 활성화의 느린 회복
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