(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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(-/-) (n=16) 마우스에서 폴리미생물 감염의 사망 률을 측정하였다. 간단하게 설명하면, MASP-2 결핍 마우스
및 그들의 야생형 한배새끼를 마취시키고 맹장을 꺼내어 말단보다 30% 위에 결찰하였다. 그 후 맹장을 0.4 mm
직경의 바늘로 한 번 천자하였다. 그 다음 맹장을 복강 속에 다시 놓고 피부를 겸자로 닫았다. CLP를 당한 마
우스의 생존률을 CLP 후 14일의 기간에 걸쳐 모니터하였다. 복막 세척액을 박테리아의 로드를 측정하기 위해
CLP 16시간 후에 마우스에서 수집하였다. 복막 세척액의 순차적 희석액을 PBS로 제조하고 뮬러 힌튼 판에 접
종하고 24시간 동안 37 ℃ 무산소 상태에서 후속 배양한 다음 박테리아 로드를 결정하였다.
박테리아 감염에 대한 TNF-알파 시토킨의 반응을 또한 폐와 비장에서 정량적 실시간 중합효소 연쇄 반응
(qRT-PCR)을 통해 CLP 16시간 이후에 야생형 (+/+) 및 MASP-2 (-/-) 마우스 측정하였다. CLP 16시간 후 야생
형 (+/+) 및 MASP-2 (-/-) 마우스 TNF-알파의 혈청 수준도 또한 샌드위치 ELISA에 의해 정량화하였다.
결과:
도 33은 CLP 과정 후 일수의 함수로서 CLP 처리된 동물의 생존 백분률을 그래프로 예시한다. 도 33에서 보이
는 바와 같이, 야생형 (+/+)과 비교하여 MASP-2 (-/-) 마우스에서 렉틴 경로 결핍은 맹장 결찰 및 천자 모델
을 사용하여 폴리미생물 감염 후 마우스의 사망률을 증가시키지 않았다. 그러나 도 34에서 보이는 바와 같이,
MASP-2 (-/-) 마우스는 야생형 (+/+) 한배새끼와 비교했을 때 CLP 후 복막 세척액에서 상당히 높은 박테리아
로드 (박테리아 수의 대략 1000배 증가)를 나타냈다. 이 결과는 MASP-2 (-/-) 결핍 마우스는 패혈 쇼크에 저
항성이 있다는 것을 가리킨다. 이 모델에서 MASP-2 결핍 마우스에서 감소된 박테리아 청소율은 C3 침착이
MASP-2 의존적이라고 증명된 것처럼 손상된 C3b 매개 식균작용 때문일 수도 있다.
박테리아 감염에 대한 TNF-알파 시토킨 반응은 야생형 (+/+) 대조군과 비교하여 MASP-2 (-/-) 마우스에서 증
가되지 않는다는 것이 결정되었다 (데이터 미도시). 또한 MASP-2 (-/-) 마우스와 대조적으로 CLP 16 시간 후
야생형 (+/+) 마우스의 상당히 높은 혈청 농도의 TNF-알파가 있었고, 이때 TNF-알파의 혈청 수준은 거의 변하
지 않고 남아있는 것으로 결정되었다. 이 결과는 패혈성 상태에 대한 강렬한 염증 반응은 MASP-2 (-/-) 마우
스에서 완화되었고 더 높은 박테리아 수의 존재에서 동물이 생존하도록 됨을 제안한다.
종합해보면, 이 결과들은 패혈증의 경우에서 렉틴 경로 보체 활성화의 잠재적 유해한 효과 및 압도적인 패혈
증의 환자들에서 증가된 사망률을 증명하였다. 이 결과들은 MASP-2 결핍이 패혈증 중 염증 면역 반응을 조절
하고 염증 매개자의 발현 수준을 감소시킨다. 그러므로 MASP-2에 대한 단클론성 억제 항체의 투여에 의한
MASP-2 (-/-)의 억제는 패혈 쇼크로 고통받고 있는 대상체에서 염증 반응을 감소시키는데 효과적일 것이다.
실시예 37
이 실시예는 쥐 비강내 전염성 모델에서 MASP-2 (-/-) 마우스의 분석을 설명한다.
배경/이론적 근거:
녹농균 (Pseudomonas aeruginosa)은, 특히 면역반응 하지 않는 개인에게 넓은 범위의 감염을 일으키는 그람
음성 기회 감염성의 인간 박테리아 병원체이다. 그것은 특히 병원에서 획득된 폐렴 같은 획득된 병원성 감염
의 주요 원천이다. 그것은 또한 낭포성 섬유증 (CF) 환자들에게 큰 이환률 및 사망률에 대한 책임이 있다. 녹
농균 폐 감염은 광범위한 조직 손상을 낳는 강한 호중성 가입 및 상당한 폐 염증이 특징적이다 (Palanki M.S.
et al., J. Med. Chem 51:1546-1559 (2008)).
이 실시예에서, 연구는 MASP-2 (-/-) 마우스의 렉틴 경로 제거가 마우스의 박테리아 감염에 대한 민감도를 증
가시키는지 결정하기 위해 착수되었다.
방법:
22마리 야생형 (+/+)마우스, 22마리 MASP-2 (-/-) 마우스, 및 11마리 C3 (-/-) 마우스를 녹농균 박테리아 균
주의 비강내 투여로 도전하였다. 마우스를 감염 후 6일에 걸쳐 관찰하고 카플란-마이어 플롯을 만들어 퍼센트
생존률을 나타내었다.
결과:
공개특허 10-2012-0099680
도 35는 감염 후 6일의 야생형 (+/+), MASP-2 (-/-) 또는 C3 (-/-) 마우스의 카플란-마이어 플롯이다. 도 35
에서 보이는 것 처럼, MASP-2 (-/-) 마우스 대 야생형 (+/+) 마우스에서 차이는 관찰되지 않았다. 그러나 C3
(-/-) 마우스에서 고전적 (Clq) 경로의 제거는 박테리아 감염에 대한 심각한 민감도를 가져왔다. 이 결과들은
MASP-2 억제가 박테리아 감염에 대한 민감도를 증가시키지 않는다는 것을 증명하는데, 고전적 보체 경로를 사
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