(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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아세틸화 또는 아미드화에 의하여 변형될 수 있다.
유도체 억제 펩티드의 합성은 펩티드 생합성, 탄수화물 생합성 등의 공지된 기법에 의존할 수 있다. 시작점으
로서, 숙련자들은 대상 펩티드의 입체구조를 결정하기 위하여 적합한 컴퓨터 프로그램을 사용할 수 있다. 본
원의 펩티드 입체구조가 공지된 경우, 숙련자들은 제공하지 않는 특성을 보유하거나 또는 모 펩티드 내에서
발견되는 것 보다 강화될 수 있으나 어떠한 종류의 치환이 염기성 입체구조 및 모 펩티드의 전하 분포를 보유
한 유도체를 형성하기 위하여 하나 이상의 부위에서 만들어질 수 있는지 합리적인 설계 방법 내에서 결정할
수 있다. 후보 유도체 분자가 확인된 경우, 유도체는 전술한 측정법을 사용하여 이들이 MASP-2 억제제로서 기
능을 하는지를 결정하기 위하여 시험할 수 있다.
MASP-2 억제 펩티드의 선별
MASP-2의 핵심 결합 영역의 분자구조를 모사하고 및 MASP-2의 보체 활성화를 억제하는 펩티드를 생성하고 선
별하기 위하여 분자 모델링 및 합리적인 분자 설계를 사용할 수 있다. 모델링에 사용된 분자 구조는 항-MASP-
2 단클론 항체의 CDR 영역, 및 이합체화에 요구되는 영역, MBL와의 결합에 관여하는 영역, 및 전술한 세린 프
로테아제 활성화 부위를 포함하는 MASP-2 기능에 중요한 것으로 알려진 표적 영역을 포함한다. 특정 표적에
결합하는 펩티드 확인 방법은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 분자 임프린팅은 마크로분자 구조
예컨대 특정 분자에 결합하는 펩티드의 신규의 제조에 사용된다. 예를 들면, Shea, KJ., "Molecular
Imprinting of Synthetic Network Polymer: The New synthesis of Micromolecular Binding and Catalytic
Sties," TRIP 2: (5) 1994를 참조.
설명적인 예로서, MASP-2 결합 펩티드 모사체의 제조 방법은 다음과 같다. 공지된 MASP-2 결합 펩티드의 기능
성 단량체 또는 MASP-2 억제 (템플릿)를 발휘하는 항-MASP-2 항체의 결합 영역을 중합하였다. 템플릿을 그 다
음 제거하고, 템플릿과 유사한 하나 이상의 특성을 발휘하는 산규의 분자를 제공하는 템플릿에의한 공백 내에
서 제2 클래스의 단량체의 중합을 하였다. 이 방식의 펩티드 제조와 함께, MASP-2 억제제 예컨대 폴리다당류,
뉴클레오시드, 약물, 핵단백질, 지질단백질, 탄수화물, 글리코단백질, 스테로이드, 지질 및 다른 생물학적 활
성 물질인 다른 MASP-2 결합 분자이 제조될 수 있다. 이 방법은 천연 대응짝 보다 안정한 다양한 생물학적 모
사체의 설계에 유용하며, 이는 일반적으로 비생분해성 골격을 지닌 화합물이 되는 기능성 단량체의 자유 라디
칼 중합에 의하여 제조되기 때문이다.
펩티드 합성
MASP-2 억제 펩티드는 당해 기술 분야에 공지된 기법, 예컨대 초기에 Merrifield, in J. Amer. Chem. Soc.
85:2149-2154, 1963에서 설명된 고체-상 합성 기법에 의하여 제조될 수 있다. 자동화 합성이 예를 들면, 제조
자의 설명에 따라 Applied Biosystems 43 IA 펩티드 합성기 (Foster City, Calif.)에 의하여 달성될 수 있다.
다른 기법은, 예를 들면, 문헌 Bodanszky, M., et al., Peptide Synthesis, second edition, John Wiley &
Sons, 1976, 및 공지의 다른 참고자료에서 찾을 수 있다.
펩티드는 당해 기술 분야의 숙련자에 공지된 표준 유전자 공학 기법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들면,
펩티드는 발현 벡터 내로 펩티드를 암호화하는 핵산의 삽입, DNA 발현, 및 필요한 아미노산의 존재하에 펩티
드로의 DNA 전이에 의하여 효소적으로 제조될 수 있다. 펩티드는 담체 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 암호
화한 펩티드를 지닌 상 내에서 발현 벡터 내로 삽입됨으로써 융합되고, 후속적으로 펩티드에서 분리되는 담체
단백질을 사용하여 분리정제할 수 있다. 융합 단백질-펩티드는 크로마토그래피, 전기영동 또는 면역학적 기법
(예컨대 담체 단백질의 항체를 통하여 수지에 결합)을 사용하여 분리될 수 있다. 펩티드는 화학적 방법 또는
효소적으로, 예를 들면, 하이드롤라아제에 의하여 분해될 수 있다.
본 발명의 방법에 유용한 MASP-2 억제 펩티드는 종래의 기법을 따라 재조합 숙주 세포 내에서 생산될 수
있다. 서열을 암호화하는 MASP-2 억제 펩티드를 발현하기 위하여, 펩티드를 암호화하는 핵산 분자는 발현 벡
터 내에서 전사 발현을 조절하고 그 다음 숙주 세포 내로 도입되는 서열에 작동가능하게 연결되어야 한다. 전
사 조절 서열과 함께, 예컨대 프로모터 및 인헨서, 발현 벡터가 발현 벡터를 담지하는 세포의 선택에 적합한
번역 조절 서열 및 마커 유전자에 포함될 수 있다.
공개특허 10-2012-0099680
MASP-2 억제 펩티드를 암호화하는 핵산 분자는 프로토콜 예컨대 포스포라미다이트법을 사용하여 "유전자
기계"로 합성될 수 있다. 화학적으로 합성된 이중-가닥 DNA가 응용 예컨대 유전자 또는 유전자 단편의 합성에
요구되는 경우, 각 상보 가닥이 각각 제조된다. 짧은 유전자 (60 내지 80 염기쌍)의 생산은 기술적으로 직접
적이며, 상보 가닥을 합성하고, 그 다음 풀림을 하여 달성될 수 있다. 긴 유전자의 생산에 있어서, 합성 유전
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