(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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자 (이중-가닥)는 길이가 20 내지 100개의 뉴클레오티드인 단일-가닥 단편에서 모듈러 형태 내에서 조립된다.
폴리뉴클레오티드 합성에 대한 연구를 위하여, 예를 들면, 문헌 Glick and Pasternak, "Molecular
Biotechnology, Principles and Applications of Recombinant DNA", ASM Press, 1994; Itakura, K., et al,
Annu. Rev. Biochem. 53:323, 1984; 및 Climie, S., et al., Proc. Nat'l Acad. ScL USA 87:633, 1990를 참조
한다.
소분자 억제제
일 실시형태에서, MASP-2 억제제는 저분자량의 천연 및 합성 물질, 예컨대 예를 들면, 펩티드, 펩티도미메틱
스 및 비펩티드 억제제 (올리고뉴클레오티드 및 유기화합물 포함)를 포함하는 소분자 억제제이다. MASP-2의
소분자 억제제는 항-MASP-2 항체의 가변 영역의 분자 구조에 기초하여 생성될 수 있다. 소분자 억제제는 컴퓨
터화 약물 설계를 사용한 MASP-2 결정 구조에 기초하여 설계되고 생성될 수 있다 (Kuntz LD., et al.,
Science 257:1078, 1992). 래트 MASP-2의 결정 구조는 문헌에 설명되었다 (Feinberg, H., et al., EMBO J.
22:2348-2359, 2003). Kuntz et al.에 의한 방법을 사용하여, MASP-2 결정 구조 배치는 MASP-2에 결합할 수
있는 소분자 구조의 목록을 산출하는 컴퓨터 프로그램 예컨대 DOCK의 입력에 사용된다. 이러한 컴퓨터 프로그
램의 사용은 당해 기술 분야의 숙련자에게 잘 알려져 있다. 예를 들면, HIV-I 프로테아제 억제제의 결정 구조
는 프로그램 DOCK를 사용하여 캠브리지 결정학 데이터베이스에서 검색된 화합물이 효소의 결합 부위에 맞는지
평가함으로써 HIV-I 프로테아제 억제제인 유일한 비펩티드 리간드를 확인하기 위하여 사용할 수 있다 (Kuntz,
LD., et al., J. Mol. Biol. 161:269-288, 1982; DesJarlais, R.L., et al., PNAS 87:6644-6648, 1990).
잠재적인 MASP-2 억제제로서 컴퓨터화 법에 의하여 확인된 소분자 구조의 목록은 예컨대, 실시예 7에서 설명
할 MASP-2 결합 측정법을 사용하여 선별되었다. MASP-2에 결합하는 것으로 알려진 소분자는 예컨대, 실시예 2
의 기능성 측정법으로 측정하여, 이들이 MASP-2-의존성 보체 활성화를 억제하는지 여부를 결정한다.
MASP-2 가용성 수용체
다른 적합한 MASP-2 억제제는 MASP-2 가용성 수용체를 포함하는 것으로 보이며, 당해 기술 분야의 숙련자에
공지된 방법을 사용하여 제조된다.
MASP-2의 발현 억제제
본 발명의 특징의 또다른 실시형태에 있어서, MASP-2 억제제는 MASP-2-의존성 보체 활성화를 억제하는 MASP-2
발현 억제제이다. 본 발명의 특징의 실시형태에서, 대표적인 MASP-2 발현 억제제는 MASP-2 안티센스 핵산 분
자 (예컨대 안티센스 mRNA, 안티센스 DNA 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드), MASP-2 리보자임 및 MASP-2
RNAi 분자를 포함한다.
안티-센스 RNA 및 DNA 분자는 MASP-2 mRNA를 하이브리드화하거나, MASP-2 단백질의 번역을 차단하여 MASP-2
mRNA의 번역을 직접적으로 차단하게된다. 안티센스 핵산 분자는 MASP-2의 발현을 방해할 수 있는 다른 다수의
방법으로 제조될 수 있다. 예를 들면, 안티센스 핵산 분자는 이들의 보체의 전사를 시키는 전사의 전상 방향
에 비하여 MASP-2 cDNA (SEQ ID NO:4)의 암호화 영역 (또는 이들의 부분)의 전환에 의하여 제조될 수 있다.
안티센스 핵산 분자는 일반적으로 최소한 표적 유전자 또는 유전자의 부분에 실질적으로 일치한다. 핵산은,
그러나, 발현을 억제하는 것이 완전하게 동일할 필요는 없다. 일반적으로, 높은 상동성이 짧은 안티센스 핵산
분자의 사용을 보상하기 위하여 사용될 수 있다. 최소 백분율 일치성은 일반적으로 약 65% 이상이나, 높은 백
분율 일치성은 더욱 효과적인 내재 서열의 발현 억제를 발휘할 수 있다. 약 80% 이상의 실질적으로 높은 백분
율 일치성이 일반적으로 바람직하나, 약 95% 내지 완전 일치가 일반적으로 가장 바람직하다.
안티센스 핵산 분자가 표적 유전자로서 동일한 인트론 또는 엑손 패턴을 보유할 필요는 없으며, 표적 유전자
의 비-암호화 부분은 암호화 부분으로서 표적 유전자 발현의 안티센스 억제를 달성하는데 동일하게 효과적일
수 있다. 긴 서열이 바람직하더라도 최소한 약 8개의 뉴클레오티드의 DNA 서열이 안티센스 핵산 분자로서 사
용될 수 있다. 본 발명에서, MASP-2의 억제제로 유용한 대표적인 실시예는 SEQ ID NO:4의 핵산 서열로 구성된
MASP-2 cDNA의 보체와 최소한 90% 일치하는 안티센스 MASP-2 핵산 분자이다. SEQ ID NO:4의 핵산 서열은 SEQ
ID NO:5의 아미노산 서열로 구성된 MASP-2 단백질을 암호화한다.
공개특허 10-2012-0099680
MASP-2 mRNA에 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드의 표적화는 MASP-2 단백질 합성의 수준을 감소시키기
위하여 사용되는 또 다른 기작이다. 예를 들면, 폴리갈락투로나아제 및 뮤스카린 타입 2 아세틸콜린 수용체의
합성은 이들의 각각의 mRNA 서열에 관계된 안티센스 올리고뉴클레오티드에 의하여 억제된다 (U.S. Patent No.
5,739,119, Cheng, 및 U.S. Patent No. 5,759,829, Shewmaker). 추가적으로, 안티센스 억제의 실시예는 핵 단
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