(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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에서 상당한 역할을 한다는 것이 입증되었다. 이는 NZB/W F1 마우스 모델에 항-C5 MoAb를 투여하면 사구체신
염의 경과를 현저히 개선시키게 된다는 사실을 추가적으로 보여주었다 (Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
93:8563-8568 (1996)). MASP-2가 렉틴 및 대체 경로 모두의 개시에서 필수적인 역할을 한다는 본원의 관찰에
기초하여, NZB/W F1 동물 모델은 사구체신염 치료제로 사용하기에 효과적인 MASP-2 억제제를 선별하기에 유용
하다.
방법: MASP-2-/- 마우스는 실시예 1에서 설명된 바와 같이 생성되었다. MASP-2-/- 마우스는 각각 NZB 및 NZW
주 (The Jackson Laboratory)에서 유도된 마우스와 교배되었다. F1 및 후속적 자손을 이종교배하여 NZB 및
NZW 유전적 배경 모두에서 동종접합 MASP-2-/-을 생산하였다. 이 모델 내에서 사구체신염의 발병기전 내의
MASP-2의 역할을 결정하기 위하여, 야생형 NZB x NZW 마우스 또는 MASP-2-/-NZB x MASP-2-/-NZW 마우스의 교
배에 의한 F1 개체 내에서 이 질환의 발달을 비교하였다. 일주일 간격으로 소변 시료를 MASP-2+/+ 및 MASP-2-
/- F1 마우스에서 수거하였으며, 소변 단백질 수준을 항-DNA 항체의 존재에 관하여 모니터링하였다 (Wang et
al., 1996, supra). 신장의 조직병리학적 분석은 혈관간 기질 침착량 및 사구체신염 발달을 모니터링하기 위
하여 수행하였다.
NZB/W F1 동물 모델은 사구체신염 치료제로 사용하기에 효과적인 MASP-2 억제제를 선별하기에 유용하다. 18
주령에서, 야생형 NZB/W F1 마우스에 항-MASP-2 억제제, 예컨대 항-MASP-2 단클론 항체 (투약량의 범위는 .01
mg/kg 내지 10 mg/kg)를 일주일 또는 이주일 간격으로 복막내 주사하였다. 상기-모니터링된 사구체신염의 조
직병리학적 및 생화학적 마커는 마우스 내의 질환 발달을 평가하고, 이 질환의 치료용으로 유용한 MASP-2 억
제제를 확인하기 위하여 사용된다.
실시예 22
이 실시예는 체외순환 (ECC) 예컨대 심폐순환 우회술 (CPB) 회로에 의한 조직 손상 결과를 예방하기 위한
MASP-2 억제제를 시험하기 위한 모델로서 튜빙 루프를 사용한느 것을 설명한다.
배경 및 이론적 근거: 전술한 바와 같이, CPB시 ECC 환자는 혈액이 체외순환 회로의 인공 표면에 노출됨으로
써, 그러나 또한 외과적 외상 및 허혈-재관류 손상 등의 표면-비의존성 인자에 의하여 부분적으로 유발되는
전신성 염증 반응을 겪게된다 ( Butler, J., et al., Ann. Thorac. Surg. 55:552-9, 1993; Edmunds, L.H.,
Ann. Thorac. Surg. 66 (Suppl):S12-6, 1998; Asimakopoulos, G., Perfurion 14:269-77, 1999). 혈액과 CPB
회로의 인공 표면간의 상호작용에 의하여, 대체 보체 경로가 CPB 회로내의 보체 활성화에 있어서 우세한 역할
을 한다는 것이 추가로 알려졌다 (Kirklin et al., 1983, 1986, 전술). 따라서, MASP-2가 렉틴 및 대체 경로
모두의 개시에서 필수적인 역할을 한다는 본원의 관찰에 기초하여, 튜빙 루프 모델은 체외순환 노출-촉발 염
증 반응의 예방 또는 치료하기 위한 치료제로 사용하기에 효과적인 MASP-2 억제제를 선별하기에 유용하다.
방법: Gupta-Bansal et al., Molecular Immunol. 37:191-201 (2000)에 설명되어 있는 바와 같이 심폐순환 우
회술 회로를 위한 전술한 튜빙 루프 모델의 변형이 사용되었다 (Gong et al., J. Clinical Immunol. 16
(4):222-229 (1996)). 요약하자면, 혈액을 건강한 대상체 내에서 7 ml 진공채혈관 (헤어핀 7 유닛/㎖의 전혈
을 함유)으로 신선하게 수거한다. CPB 과정에서 사용된 것과 유사한 폴리에틸렌 튜빙 (예컨대, LD. 2.92 mm;
O.D. 3.73 mm, 길이: 45 cm)에 1 ml의 혈액이 충전되고, 작은 단편의 실리콘 튜빙을 구비한 루프로 마감하였
다. 헤어핀화된 혈액과 10 mM EDTA를 함유한 대조군 튜빙을 배경 대조군로서 연구에 포함시켰다. 시료 및 대
조군 튜빙을 수조 내에서 37℃로 1 시간동안 수직으로 회전시켰다. 배양 후, 혈액 시료를 1.7 ml 마이크로퓨
즈 튜브 (EDTA 함유)로 이동시켜 최종 농도가 20 mM EDTA가 되도록 하였다. 시료를 원심분리하였으며, 혈장을
수거하였다. MASP-2 억제제, 예컨대 항-MASP-2 항체를 회전시키기 직전에 헤어핀화된 혈액에 첨가하였다. 혈
장 시료를 C3a 및 가용성 C5b-9의 농도를 측정하기 위한 측정법에 가하였다 (Gupta-Bansal et al., 2000,
supra).
실시예 23
이 실시예는 패혈증 또는 격렬한 패혈증, 패혈 쇼크, 패혈증 및 전신 염증 반응 증후군에 의한 급성 호흡 곤
란 증후군 결과를 포함하는 패혈증 증상 결과를 치료하기에 유용한 MASP-2 억제제를 시험하는 설치류 맹장 결
찰 및 천자 (CLP) 모델 시스템의 사용을 설명한다.
공개특허 10-2012-0099680
배경 및 이론적 근거: 전술한 바와 같이, 보체 활성화는 다수의 연구들에서 패혈증의 발병기전에 중요한 역할
을 하는 것으로 나타났다 (Bone, R.C., Annals. Internal. Med. 115:457-469, 1991). CLP 설치류 모델은 인간
패혈증의 임상적 결과를 모사하는 모델로 인식되고 있으며, 인간 패혈증의 합리적인 대체 모델로 간주된다
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