(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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마우스에 단클론 항체 칵테일 (Chondrex, Redmond WA) (5 mg)을 실험 0 및 1일에 정맥 주사하였다. 시험 약제
는 Chondrex사의 단클론 항체 + LPS였다. 실험 2일에, 마우스에 LPS를 ip 투약하였다. 마우스는 0, 2, 4, 6,
8, 10, 12일 및 종결 전인 14일에 체중을 측정하였다. 14일에, 마우스를 이소플루란으로 마취시켰으며, 최종
적으로 혈청을 방혈하였다. 혈액 수거 후, 마우스 안락사시켰으며, 앞, 뒷 다리를 무릎까지 제거하여, 추후의
과정을 위하여 포르말린에 넣었다.
치료군:
1 군 (대조군): 4마리 마우스 C57/BL/6 WT (+/+)주 ;
2 군 (시험군): 10마리 마우스 C57/BL/6 WT (+/+)주 (mAb 칵테일 + LPS); 및
3 군 (시험군): 10마리 마우스 C57/BL/MASP-2KO/6Ai (-/-)주 (mAb 칵테일 + LPS)
임상적 관절염 스코어는 다음의 스코어 시스템으로 매일 평가되었다:
0 = 정상; 1= 1개의 뒤 또는 앞발 관절 영향; 2= 2개의 뒤 또는 앞발 관절 영향; 3= 3개의 뒤 또는 앞발 관절
영향; 4= 중등 (홍반 및 증등의 종창, 또는 4 발가락 관절 영향); 5= 심각 (확산된 홍반 및 심각한 종창의
발, 발가락 유동 불가)
결과:
도 19는 2주까지의 평균 일일 임상적 관절염의 스코어를 도시한 군 데이터를 나타낸다. 임상적 관절염 스코어
는 CoL2 MoAb 치료를 받지 않은 대조군군에서 관찰되지 않았다. MASP (-/-) 마우스는 9 내지 14일에 낮은 임
상적 관절염 스코어를 받았다. 전체 임상적 관절염 스코어는 WT (+/+) 마우스에 비하여 MASP-2 (-/-)군에서
21% 감소를 나타내는 곡선 분석 (AUC)하의 영역이다. 그러나, 전술한 C57B16 마우스 배경은 강건한 전체 관절
염 임상적 스코어를 제공하지 못한다. 작은 발생율 및 군의 크기에 기인하여, 양성 경향의 경우에도, 데이터
는 단지 경향만을 제공하며 (p = 0.1), p < 0.05 수준에서 통계학적으로 현저하지 못하였다. 치료군의 추가의
동물이 통계학적 중요성을 나타내는데 필요하다. 관절염 발생 감소에 기인하여, 발병된 발의 스코어가 중증도
에 관하여 평가되었다. 3 이상의 임상적 관절염 스코어의 단일 발생은 MASP-2 (-/-)마우스 내에서 발견되지
않았으며, 30%의 WT (+/+) 마우스에서 관찰되었고, 추가의 제안은 (1) 관절염의 중증도가 보체 경로 활성화에
관련될 수 있으며 (2) MASP-2의 차단이 관절염에 이득이 될 수 있다는 것이다.
실시예 30
이 실시예는 소형 만노스-결합 렉틴-결합 단백질 (map19 또는 sMAP)이 MASP-2 의존성 보체 활성화의 억제제라
는 사실을 입증한다.
배경/이론적 근거 :
요약:
만노스-결합 렉틴 (MBL) 및 피콜린은 선천성 면역성을 활성화시키는 패턴 인식 단백질이며, MBL-유관 세린 프
로테아제 (MASPs)를 통한 렉틴 보체 경로의 활성화를 촉발시킨다. 렉틴 경로의 활성화에서, MASP-2는 C4 및
C2를 분해한다. 소형 MBL-유관 단백질 (sMAP), 절단형 MASP-2는 MBL/피콜린-MASP 복합체와 결합한다. sMAP의
역할을 분명히하기 위하여, sMAP-특이적 엑손의 표적 파괴하여 sMAP-결핍 (sMAP-/-) 마우스를 생성하였다. 유
전자 파괴의 의하여, sMAP-/- 마우스에서 MASP-2의 발현 수준이 감소하였다. 재조합 sMAP (rsMAP) 및 재조합
MASP-2 (rMASP-2)는 결핍 혈청내에서 MBL-MASP-sMAP 복합체를 재구성하는 경우, 이러한 재조합체와 MBL의 결
합은 경쟁적이며, MBL-MASP-sMAP 복합체의 C4 분열 활성이 rMASP-2의 첨가에 의하여 회복되고, 여기서 rsMAP
의 첨가는 활성을 감소시킨다. 따라서, MASP-2는 C4의 활성화에 필수적이며, sMAP는 렉틴 경로의 활성화에서
조절 역할을 한다.
도입:
공개특허 10-2012-0099680
보체 시스템은 프로테오용해의 사슬 반응 및 단백질 복합체의 조립을 매개하며, 선천성 및 후천성 면역 시스
템 모두의 일부로서 생체방어의 주요 역할을 한다. 포유류 보체 시스템은 3개의 활성화 경로, 고전적 경로,
대체 경로, 및 렉틴 경로로 구성되어 있다 (Fujita, Nat. Rev. Immunol. 2: 346-353 (2002); Walport, N Engl
J Med 344: 1058-1066 (2001)). 렉틴 경로는 침입 병원체에 대한 1차 방어선을 제공한다. 이 경로의 병원체
인식 성분인, 만노스-결합 렉틴 (MBL) 및 피콜린은, 박테리아, 바이러스, 및 기생충의 표면상의 탄수화물 어
레이에 결합하며, MBL-결합 혈청 프로테아제 (MASPs)를 활성화하여 하방 반응 캐스케이드를 촉발한다. 선천성
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