(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

[0564]
[0565]
[0566]
[0567]
[0568]
[0569]
[0570]
[0571]
[0572]
[0573]
[0574]
[0575]
델 및 보체 억제제 예컨대 가용성 수용체 타입 1 (CR1)을 사용하여 입증된 바와 같이 조직 손상의 범위는 허
혈의 길이에 관련되며, 보체에 의하여 매개된다 (Weisman et al., Science 249:146-151, 1990; Mulligan et
al., J. Immunol. 148:1479-1486, 1992; Pratt et al, Am. J. Path. 163 (4): 1457-1465, 2003). 동물 이식
모델은 문헌 Pratt et al., Am. J. Path. 163 (4): 1457-1465에 설명되어 있으며, 이는 MASP-2 억제제가 이식
된 조직이 허혈/재관류 손상되는 것으로부터 보호하는 능력을 선별하는 MASP-2-/- 마우스 모델 및/또는 MASP-
2+/+ 모델 시스템으로 사용하기 위하여 변형된다. 이식 전 관류 유체에 의한 공여자 신장의 관류는 공여자 신
장 내로 항-MASP-2 억제제가 도입될 기회를 제공한다.
방법: MASP-2-/- 및/또는 MASP-2+/+ 마우스를 마취시켰다. 공여자 좌측신장은 절개하여, 대동맥을 머리방향으
로 결찰하고, 신장 동맥을 또리쪽으로 결찰하였다. 포르텍스 튜브 카데터 (Portex Ltd, Hythe, UK)를 결찰부
사이에 삽입하였고, 신장에 5 ml의 솔트론 신장 관류 용액 (Baxter Health Care, UK)과 MASP-2 억제제 예컨대
항-MASP-2 단클론 항체 ( 투약량의 범위는 .01 mg/kg 내지 10 mg/kg)를 최소한 5 분간 관류시켰다. 신장 이식
을 수행하였으며, 마우스의 경과를 모니터링하였다.
이식 수여자의 분석: 신장 이식편을 다양한 시간 간격에서 수확하였으며, 조직 섹션은 C3 침착의 정도를 결정
하기 위하여 항-C3를 사용하여 분석하였다.
실시예 20
이 실시예는 류마티스 관절염 (RA)을 치료하기에 유용한 MASP-2 억제제를 시험하기 위한 콜라겐-유도성 관절
염 (CIA) 동물 모델의 사용을 설명한다.
배경 및 이론적 근거: 콜라겐-유도성 관절염 (CIA)은 자연형 II 콜라겐으로 면역 후 감염되기 쉬운 설치류 및
영장류 주에서 유도되는 자가면역 다발성관절염을 나타내며, 인간 류마티스 관절염 (RA)의 유관 모델로서 인
식된다 (Courtney et al., Nature 283: 666 (1980); Trenthan et al., J. Exp. Med. 146: 857 (1977)). RA 및
CIA 모두는 관절 염증, 판누스 형성 및 연골 및 골 미란에 의하여 특성화된다. CIA 걸리기 쉬운 뮤린주
DBA/1LacJ는 보빈 타입 II 콜라겐으로 면역화된 후 임상적 격렬한 관절염을 발달시키는 마우스 CIA 모델로 개
발되었다 (Wang et al., J. Immunol. 164: 4340-4347 (2000)). C5-결핍 마우스주를 DBA/1LacJ와
교배시켰으며, 결과주는 CIA 관절염 발달에 저항성인 것으로 나타났다 (Wang et al., 2000, supra).
MASP-2가 렉틴 및 대체 경로 모두의 개시에서 필수적인 역할을 한다는 본원의 관찰에 기초하여, CIA 관절염성
모델은 RA 치료제로 사용하기에 효과적인 MASP-2 억제제를 선별하기에 유용하다.
방법: MASP-2-/- 마우스는 실시예 1에서 설명된 바와 같이 생성되었다. MASP-2-/- 마우스는 DBA/1LacJ 균주
(The Jackson Laboratory)에서 유도된 마우스와 교배되었다. F1 및 후속적 자손을 이종교배하여 DBA/1LacJ 계
열 동종접합 MASP-2-/-를 생산하였다.
콜라겐 면역화는 문헌 Wang et al., 2000, supra에 설명된 바와 같이 수행되었다. 요약하자면, 야생형
DBA/1LacJ 마우스 및 MASP-2-/- DBA/1LacJ 마우스는 0.01 M 아세트산 (농도 4 mg/㎖)으로 용해된 보빈 타입
II 콜라겐 (BCII) 또는 마우스 타입 II 콜라겐 (MCII) (Elastin Products, Owensville, MO)로 면역화되었다.
각 마우스는 200 ug CII 및 100 ug 마이코박테리아를 꼬리 기저부의 진피내에 주사되었다. 마우스는 21일 후
재-면역화되었으며, 관절염의 외관을 매일 조사하였다. 관절염 지표는 각 발병한 발의 관절염 중증도에 관하
여 시간에 따라 평가되었다.
MASP-2 억제제는 콜라겐 면역화 시점에서, 전신적으로나, 또는 하나 이상의 관절에 국부적으로 MASP-2 억제제
예컨대 항-MASP-2 단클론 항체 (투약량의 범위는 .01 mg/kg 내지 10 mg/kg)를 주사함으로써 야생형 DBA/1LacJ
CIA 마우스 내에서 선별되었으며, 관절염 지표는 전술한 바와 같이 시간 경과에 따라 평가되었다. 치료제로서
항-hMASP-2 단클론 항체는 MASP-2-/-, hMASP-+/+ 넉-인 DBA/1LacJ CIA 마우스 모델 내에서 간단하게 평가되었
다.
실시예 21
이 실시예는 면역-복합체 매개 사구체신염을 치료하기에 유용한 MASP-2 억제제를 시험하기 위한 (NZB/W) F1
동물 모델의 사용을 설명한다.
공개특허 10-2012-0099680
배경 및 이론적 근거: 뉴질랜드 블랙 x 뉴질랜드 화이트 (NZB/W) F1 마우스는 인간 면역-복합체 매개 사구체
신염과 상당한 유사성을 지닌 자가면역 증후군을 자체적으로 발달시킨다. NZB/W F1 마우스 12 월령경에 예외
없이 사구체신염을 겪게된다. 전술한 바와 같이, 보체 활성화가 면역-복합체 매개 사구체신염의 발병 기전 내
- 76 -