(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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수 있는 두 RNA 가닥을 합성함으로써 제조될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 방법에 유용한 dsRNA 분자는 서
열에 상응하는 RNA를 포함할 수 있으며, 이들의 보체는 표 4에 나열하였다. 바람직하게는, 최소한 하나의 RNA
가닥은 1-5 뉴클레오티드에서 3' 오버행을 보유한다. 합성된 RNA 가닥은 이중-가닥 분자를 형성하는 상태하에
서 결합된다. RNA 서열은 25개의 뉴클레오티드 또는 그 이하의 총 길이의 SEQ ID NO:4의 최소한 8개의 뉴클레
오티드 부분을 포함한다. 주어진 표적의 siRNA 서열의 설계는 당해 기술 분야의 숙련자의 범위 내에 있다. 상
업적 서비스를 siRNA 서열 설계에 사용할 수 있으며, 발현의 최소한 70% 넉다운을 보장한다 (Qiagen,
Valencia, Calif).
dsRNA는 약학적 조성물로서 투여되며, 알려진 방법에 의하여 수행되고, 여기서 핵산은 바람직한 표적 세포 내
로 도입된다. 일반적으로 사용되는 유전자 전이 방법은 인산 칼슘, DEAE-덱스트란, 전기천공, 미소주사 및 바
이러스법을 포함한다. 이러한 방법은 문헌 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John
Wiley & Sons, Inc., 1993에서 개시되었다.
리보자임은 MASP-2의 양 및/또는 생물학적 활성을 감소시키기 위하여 사용될 수 있으며, 예컨대 MASP-2 mRNA
을 표적화하는 리보자임이다. 리보자임은 리보자임의 서열에 완전히 또는 부분적으로 상동인 서열을 보유한
핵산 분자를 분열시킬 수 있는 촉매성 RNA 분자이다. 리보자임 이동유전자 설계는 표적 RNA와 특이적으로 짝
을 이루고, 특이적 위치에서 포스포디에스터 골격을 분해하고, 따라서 표적 RNA를 기능적으로 불활성화시킨
RNA 리보자임을 암호화할 수 있도록 한다. 이 분열의 수행에서, 리보자임은 그 자체로서 변형되지 않고, 따라
서 재활용되어 다른 분자의 분해가 가능하다. 안티센스 RNA 내에 리보자임 서열이 포함되어 이들에 RNA-분열
활성을 부여한다. 따라서 안티센스 구조체의 활성을 증가시킨다.
본 발명의 실시에 유용한 리보자임은 일반적으로 최소한 약 9 뉴클레오티드의 혼성화 영역을 포함하며, 이는
뉴클레오티드 서열내에서 표적 MASP-2 mRNA의 최소한 일부에 상보적이며, 표적 MASP-2 mRNA를 분열시키는 촉
매성 영역에 상보적이다 (일반적으로, EPA No. 0 321 201; WO88/04300; Haseloff, J., et al, Nature
334:585-591, 1988; Fedor, M.J., et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA 87:1668-1672, 1990; Cech, T.R., et
al, Ann. Rev. Biochem. 55:599-629, 1986).
리보자임은 리보자임 서열을 포함하는 RNA 올리고뉴클레오티드의 형태 내에서 세포에 직접적으로 표적화될 수
있거나, 또는 소망하는 리보자임 RNA를 암호화하는 발현 벡터로서 세포 내로 도입될 수 있다. 리보자임은 안
티센스 폴리뉴클레오티드에서 설명된 동일한 방법에 사용되거나 적용될 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 안티-센스 RNA 및 DNA, 리보자임 및 RNAi 분자는 공지의 모든 DNA 및 RNA 분자의
합성법으로 제조될 수 있다. 이러한 것은 공지된 올리고데옥시리보뉴클레오티드 및 올리고리보뉴클레오티드의
화학적 합성 기법, 예컨대 예를 들면 고체상 포스포라미다이트 화학 합성을 포함한다. 대안적으로, RNA 분자
는 안티센스 RNA 분자를 암호화하는 DNA 서열의 시험관 내 및 생체 내 전사에 의하여 생성될 수 있다. 이러한
DNA 서열은 적합한 RNA 폴리머라아제 프로모터, 예컨대 T7 또는 SP6 폴리머라아제 프로모터에 통합된 다양한
벡터 내로 통합될 수 있다. 대안적으로, 사용된 프로모터에 의존하는, 구조적으로 또는 유도적으로 안티센스
RNA를 함성하는 안티센스 cDNA 구조체가 세포주 내에서 안정적으로 도입될 수 있다.
공지의 다양한 DNA 분자 변형이 안정성 및 반감기를 증가시키는 수단으로서 도입될 수 있다. 유용한 변형은
분자의 5' 및/또는 3' 말단에 대한 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드의 측면보호 서열의 첨가
또는 올리고데옥시리보뉴클레오티드 골격 내에서 포스포디에스테라아제 결합 보다는 포스포로티오에이트 또는
2'O-메틸의 사용을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
V. 약학적 조성물 및 전달 방법 투약
본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 MASP-2 억제제의 치료학적 유효량 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포
함하는 MASP-2-의존성 보체 활성화의 역효과를 억제하는 조성물을 제공한다. MASP-2 억제제는 MASP-2-의존성
보체 활성화 유관 증상을 치료 또는 개선시키기 위하여 치료학적으로 유효한 투약량으로 이들이 필요한 대상
체에 투여된다. 치료학적으로 유효한 투약량은 MASP-2 억제제 충분한 양으로서 증상을 개선시키는 양을 의미
한다.
공개특허 10-2012-0099680
MASP-2 억제제의 독성 및 치료 효능은 실험 동물 모델, 예컨대 실시예 3의 인간 MASP-2 삽입유전자를 발현하
는 뮤린 MASP-2 -/- 마우스 모델을 사용하여 표준 약학적 과정에 의하여 결정되었다. 이러한 동물 모델을 사
용하여, 표준 방법에 의하여NOAEL (역효과 수준 미관찰) 및 MED (최소 효과 투약량)을 결정할 수 있다. NOAEL
및 MED 효과간의 투약 비율은 치료적 비율이며, 이는 NOAEL/MED비로 표현된다. 큰 치료적 비율 또는 지표를
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