(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

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결과는 렉틴 경로에 의한 보체 활성화가 신장 I/R 손상의 병태생리학에 현저히 기여하며, MASP-2-/- 마우스가
더 빠른 신장 기능 회복을 보여준다는 가설을 강하게 지지한다.
실시예 32
이 실시예는 트롬빈 활성화가 생리학적 상태에서 렉틴 경로 활성화 다음에 발생할 수 있다는 것을 증명하고,
MASP-2의 관련 범위를 증명한다. 정상 래트 혈청에서, 렉틴 경로 활성화는 트롬빈 활성화 (트롬빈 침착으로
평가됨)와 동시에 보체 활성화 (C4 침착으로 평가됨)를 이끈다. 도 28a 및 28b에서 볼 수 있듯이, 이 시스템
에서 트롬빈 활성화는 MASP-2 차단 항체 (Fab2 포맷)에 의해 억제되며, 보체 활성화 (도 28a)와 유사한 억제
농도-반응 커브 (도 28b)를 나타낸다.. 이들 데이터는 외상에서 발생하는 것 처럼 렉틴 경로의 활성화는
MASP-2에 전체적으로 의존하는 과정에서 보체 및 응고 장애 시스템 둘 다의 활성화를 이끌 것으로 제안한다.
추론에 의하면, 미뤄 생각한 결과, MASP-2 차단 항체는, 예를 들어, 파종성 혈관내 응고 같은, 주요 외상의
경우에서 치사로 이어지는 특징 중의 하나인 과도한 전신의 응고 장애의 경우를 완화하는데에 효험이 있는 것
을 증명할 수도 있다.
실시예 33
이 실시예는 DIC에서 렉틴 경로의 역할을 평가하기 위해 MASP-2-/- 결핍 및 MASP-2+/+ 충분 마우스에서 파종
성 혈관내 응고 ("DIC")의 국부적 슈왈츠만 반응 모델을 사용하여 발생된 결과를 제공한다.
배경/이론적 근거:
상기 설명한 바와 같이, MASP-2의 봉쇄는 렉틴 경로의 활성화를 억제하고 아나필라톡신 C3a 및 C5a 둘 다의
발생을 감소시킨다. C3a 아나필라톡신은 시험관 내에서 강력한 혈소판 응집체인 것으로 나타날 수 있지만 그
것들의 생체 내에서의 수반은 덜 정의되고 상처 회복에서 혈소판 물질 및 플라스민의 방출은 단지 이차적으로
보체 C3와 관계할 수도 있다. 이 실시예에서, MASP-2 (-/-) 및 야생형 (+/+) 마우스에서 파종성 혈관내 응고
를 발생시키기 위해 C3 활성화의 연장된 향상이 필요한지를 알기 위해 렉틴 경로의 역할을 분석하였다.
방법:
이 연구에 사용된 MASP-2 (-/-) 마우스는 실시예 27에 설명된 바와 같이 발생되었다. 국부적 슈왈츠만 반응
모델이 이 실험에 사용되었다. 국부적 슈왈츠 반응 (LSR)은 선천적 면역 시스템의 세포 및 채액성 요소들로부
터 잘 특징지어진 기여를 하는 리포다당류 (LPS) 유발 반응이다. 보체에서 LSR 의존성은 잘 확립되어 있다
(Polak, L., et al., Nature 223:738-739 (1969); Fong J.S. et al., J Exp Med 134:642-655 (1971)). LSR
모델에서, 마우스는 TNF 알파 (500 ng, 음낭내)로 4 시간 동안 프라이밍화되었고, 그 다음 마우스를 마취시키
고 고환거근의 생체 내 현미경 관찰을 준비했다. 원활한 혈류 (1-4 mm/s) 에서 후모세혈관 정맥 (15-60 μm
직경) 망을 관찰에 의해 선택하였다. 동물을 호중구, 또는 혈소판을 선택적으로 표지하기 위해 형광 항체로
처리하였다. 이어서 혈관 망을 스캔하고 모든 혈관의 이미지는 나중 분석을 위해 디지털방식으로 기록하였다.
미소순환의 기초 상태를 기록한 후, 마우스는 한 번의 LPS (100 μg), 단독으로 또는 하기 나열된 시약들과
함께 정맥 주사를 맞았다. 같은 혈관 망을 1 시간 동안 매 10분마다 스캔하였다. 형광단의 특이적 누적은 바
탕 형광을 감해서 확인하였고 이미지를 문턱 치화함으로써 향상시켰다. 반응의 정도는 기록된 이미지로부터
측정하였다. 슈왈츠맨 반응의 일차적인 척도는 합계 데이터이다.
본 연구는 알려진 보체 경로 혈액감소제, 코브라 베놈 팩터 (CVF) 또는 말단 경로 억제제 (C5aR 대항물질) 중
어느 하나에 노출된 MASP-2 +/+충분, 또는 야생형 마우스를 비교하였다. 결과 (도 29a)는 CVF 뿐만 아니라
C5aR 대항물질이 둘 다 맥관 구조에서 응집체의 나타남이 방지되었다는 것을 증명한다. 게다가 MASP-2-/- 결
핍 마우스 (도 29b)는 또한 국부의 슈왈츠맨 반응의 완전한 억제를 증명하였고 렉틴 경로와 수반을 지지한다.
이 결과들은 명백하게 DIC 발생에 있어 MASP-2역할을 증명하고, DIC의 치료 및 예방을 위해 MASP-2의 사용을
지지한다.
실시예 34
이 실시예는 쥐 심근 허혈/재관류 모델에서 MASO-2 (-/-) 마우스의 분석을 설명한다.
배경/이론적 근거
공개특허 10-2012-0099680
관상동맥 허혈성 손상 후 염증 재관류 손상에 MASP-2의 기여를 평가하기 위해, MASP-2 (-/-) 및 MASP-2 (+/+)
마우스를 랑겐도르프 분리-살포 마우스 심장 모델에서 Marber et al., J. Clin Invest. 95:1446-1456 (1995)
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