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MATERIALES Y MÉTODOS
TRIS/HCl 0,5 M, pH 8,8; y solución tampón de TRIS/HCl + 2% SDS. La relación
masa:solvente fue de 1:10 (p/v). Los tubos se agitaron por 30 min y se centrifugaron
20 min a 3000x g. El sobrenadante fue mezclado con solución tampón de muestra
(0,063 M Tris/HCl, pH 6,8; 1,5% p/v SDS, 10% v/v glicerol y 0,01% p/v azul de
bromofenol) y las proteínas fueron separadas mediante electroforesis en gel de
poliacrilamida (SDS-PAGE) bajo condiciones no reductoras. Las electroforesis se
realizaron en placa (70 x 80 mm) en geles de 75 mm de espesor, de acuerdo al sistema
de tampón discontinuo de Laemmli (1970). Las subunidades proteicas se analizaron
mediante un procedimiento de electroforesis en gel con un concentrador (stacking) y
un separador, con 4% y 12% de acrilamida, respectivamente.
Se utilizó un equipo Mini Protean II Dual Slab Cell (Bio-Rad laboratories, Filadelfia,
EUA). Las corridas se hicieron con voltaje constante (150 V), hasta que el marcador
del frente alcanzó el final del gel (aproximadamente 90 min).
Se utilizaron como marcadores de masa molecular una mezcla constituida por miosina
(200 000), β-galactosidasa (116 250), fosforilasa-β (97 400), albúmina sérica (66 200),
ovoalbúmina (45 000), anhidrasa carbónica (31 000), inhibidor de tripsina (21 500) y
lisozima (14 400) (Bio-Rad laboratories, Filadelfia, EUA).
Los geles fueron teñidos con 0,25% p/v azul brillante de coomassie en una solución de
metanol:agua:ácido acético (4:5:1 v/v) y fueron desteñidos en el mismo solvente.
2.4.6. Caracterización del almidón
Calorimetría diferencial de barrido (DSC). La calorimetría diferencial de
barrido es una técnica en la cual la muestra en estudio y el material de referencia se
someten a un programa controlado de temperatura y se mide la diferencia de energía
entre ambos, en función de la temperatura alcanzada. En este trabajo, luego de cada
corrida se obtuvieron el cambio de entalpía (ΔH) y las temperaturas de transición. La
calibración de equipo se realizó utilizando indio y la referencia utilizada fue una
cápsula vacía con tapa de aluminio. Se realizaron un mínimo de dos determinaciones
de cada lote, que se informaron como valor promedio ± desvío estándar.
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