LAS INFECCIONES DE TRANSMISIÓN SEXUAL. - Euskadi.net

ANEXO II. ALGUNOS ASPECTOS RELACIONADOS
CON LOS MÉTODOS DIAGNÓSTICOS DE LAS ITS
1. MÉTODOS DE DETECCIÓN MEDIANTE
AMPLIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
PARA EL DIAGNÓSTICO DE CHLAMYDIA
TRACHOMATIS Y NEISSERIA GONO-
RRHOEAE: PERSPECTIVA ACTUAL Y
FUTURA
1.1. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE LA
INFECCIÓN POR C. TRACHOMATIS
1.1.1. Técnicas de diagnóstico convencional
Las pruebas empleadas actualmente para el
diagnóstico de la infección por C. trachomatis
incluyen el cultivo, la detección de antígeno
mediante técnicas de EIA y la inmunofluorescencia
directa.
El cultivo es el único método que se basa en
la detección de las formas vivas de C. trachomatis.
En el pasado fue considerado como el
estándar de referencia para evaluar la validez
de nuevas pruebas diagnósticas por su alta
especificidad y moderadamente alta sensibilidad
bajo condiciones óptimas de procesamiento.
Brevemente, la técnica consiste en la
inoculación en un tapiz monocapa confluente
de células McCoy de una muestra enviada
en un medio de transporte específico. Tras 48
horas de crecimiento se desarrollan inclusiones
intracitoplasmáticas que son visibles mediante
una tinción inmunofluorescente con
anticuerpo monoclonal. Las principales desventajas
de esta técnica son su laboriosidad y
la gran cantidad de tiempo empleada para su
desarrollo.
La detección de antígeno del lipopolisacárido
(LPS) mediante EIA empleando anticuerpo
mono o policlonales es una técnica empleada
en algunos laboratorios. A pesar de ser una
técnica relativamente rápida presenta la desventaja
de la escasa especificidad de la técnica,
ya que los anticuerpos anti - LPS ofrecen reacciones
cruzadas con otras especies bacterianas
así como con otras especies de Chlamydias
(por ejemplo: C. pneunomiae y C. psittaci), lo
cual limita su uso para el diagnóstico clínico.
La inmunofluorescencia directa es una técnica
rápida en la cual el material clínico obtenido
se deposita en un portaobjetos y se tiñe
mediante una tinción inmunofluorescente
empleando anticuerpo monoclonal contra la
proteína mayor de superficie (como en el cultivo)
o bien contra el LPS (como en el EIA). A
pesar de ser una técnica de diagnóstico rápido,
es una técnica subjetiva de difícil interpretación
que requiere un microscopista experimentado.
A pesar de esta desventaja algunos
laboratorios emplean esta técnica en el diagnóstico
de confirmación de la infección por
C. trachomatis.
Actualmente en el Laboratorio de Microbiología
de Hospital de Basurto se emplean tanto el
cultivo como la inmunofluorescencia directa
para el diagnóstico de la infección por C. trachomatis.
1.1.2. Técnicas de detección de ácidos nucleicos
Existen disponibles en el mercado múltiples
técnicas para la detección de ácidos nucleicos
de C. trachomatis así como distintos protocolos
no comerciales de amplificación y detección
de DNA ó RNA mediante PCR. Las secuencias
objetivo se encuentra en el plásmido
críptico presente en C. trachomatis. Este plásmido
consta de 7.500 pares de bares y existen
10 copias del mismo en cada organismo de
C. trachomatis. Aparentemente esta peculiaridad
supone una ventaja ya que al menos teóricamente
incrementa la sensibilidad del test
respecto a otras estrategias diagnósticas empleando
otras secuencias objetivo como las
definidas para el gen omp1 que codifica la
proteína mayor de superficie. No obstante algunos
estudios sugieren la existencia de algunas
cepas de C. trachomatis que no disponen
de plásmido críptico aunque esta circunstancia
sucede en menos de un 2 por mil de los casos.
Actualmente existen tres pruebas comerciales
basadas en diferentes técnicas de amplificación
y detección de ácidos nucleicos para el
diagnóstico molecular de la infección por
219